Participación de la autofagia y las poliaminas en la metaciclogénesis de Trypanosoma cruzi

VANRELL MC; CUETO JA; CASASSA AF; CARRILLO C; ROMANO PS

Mar del Plata

Congreso; IX CONGRESO ARGENTINO DE PROTOZOOLOGIA Y ENFERMEDADES PARASITARIAS; 2011

SAP

El proceso de diferenciación de E a TM, llamado metaciclogénesis, se produce en el intestino del vector. Aunque los mecanismos moleculares que están implicados en este proceso son poco conocidos, se sabe que la escasez de nutrientes a los que se someten los E luego de su elevada multiplicación es un factor clave. La Autofagia es un proceso cuyo objetivo es la degradación de componentes intracelulares. Debido a que el ayuno, o escases de nutrientes es el principal estimulo de la misma, nos preguntamos cómo este proceso modula la metaciclogénesis de T. cruzi. Para ello pusimos a punto un proceso de diferenciación in vitro previamente descripto en Ferreira et al (1999) sobre E de la cepa Y-GFP. Nuestros resultados demuestran, tanto por microscopía de fluorescencia como por espectrofluorometría, que los parásitos sometidos a la primera etapa de diferenciación en medio TAU presentan mayor número de compartimientos teñidos con MDC, un marcador de autofagosomas, en comparación con sus controles. Además inductores de la autofagia como rapamicina (R) aumentan la marcación mientras que inhibidores como wortmanina (W) la disminuyen significativamente. Similares resultados se obtuvieron usando DQ-BSA un marcador de compartimientos degradativos. En estos parásitos también se pudo observar un incremento de estructuras multivesiculares por microscopía electrónica, indicando que la vía autofágica y degradativa son activadas durante la Metaciclogénesis de T. cruzi. Además la capacidad infectiva de estas muestras sobre monocapas de células Vero aumenta ó disminuye significativamente al usar R ó W respectivamente indicando una mayor o menor generación de TM. Por otro lado, resultados previos demuestran que las Poliaminas (PA) son requeridas durante la diferenciación de T. cruzi (Barclay, Morosi, Vanrell et al, 2011). Usando una cepa doble mutante de T. cruzi que co-expresa GFP y ODC (Y-GFP-ODC) y que es capaz de sintetizar PA endógenas pudimos observar que aún en condiciones control esta cepa presenta una elevada marcación con MDC lo que indica una mayor capacidad autofágica. Concluimos que la vía autofágica es fundamental para el proceso de Metaciclogénesis, y que la mayor capacidad de diferenciar de la cepa doble mutante se debe a su incrementada actividad autofágica.