Trypanosoma cruzi doble mutante para estudiar el rol de las poliaminas en Chagas

BARCLAY JJ, VANRELL MC; MOROSI LG; TREJO EC; ROMANO PS; CARRILLO C

Mar del Plata

Congreso; IX CONGRESO ARGENTINO DE PROTOZOOLOGIA Y ENFERMEDADES PARASITARIAS; 2011

SAP

*Ambos autores contribuyeron igualitariamente. Las poliaminas son compuestos celulares ubicuos esenciales para Trypanosoma cruzi. Este parásito no puede sintetizar poliaminas de novo (por ausencia del gen de la ornitina descarboxilasa: ODC). Por ello, T. cruzi depende estrictamente del transporte de poliaminas disponibles en el medio extracelular. El objetivo de este trabajo consistió en comenzar a estudiar el rol de las poliaminas en supervivencia, proliferación, diferenciación e infectividad de T. cruzi. Para ello se construyeron una cepa Y doble mutante, y un clon derivado, que expresan una actividad ODC y la proteína verde fluorescente (GFP). Tanto la cepa como el clon ?Y-GFP-ODC? fluorescen y se volvieron protótrofos para poliaminas, proliferando de igual modo en medio rico (BHT y Diamond) como en medio pobre en poliaminas (SDM79), presentando un tiempo de duplicación promedio de 2,4 días y una densidad máxima de 80 millones/ml. La ODC heteróloga mostró una actividad específica de 33,4 ± 3,28 nmoles/h/mg de proteína en la cepa Y-GFP-ODC y una actividad 15 veces mayor en el clon. En ensayos in vitro, la ODC heteróloga fue notablemente inhibida por difluormetil ornitina (DFMO), sin embargo la proliferación del clon no se vio fuertemente afectada por el inhibidor; esto podría justificarse por la alta actividad enzimática presentada por dicho clon y la permeabilidad al DFMO relativamente baja. En ensayos de metaciclogénesis encontramos que la cepa y el clon mutantes tienen una capacidad de diferenciación casi dos veces superior a la cepa salvaje; dicho aumento se revirtió en presencia del DFMO. Complementariamente, la diferenciación de la cepa salvaje presentó niveles similares a los de las mutantes protótrofas cuando el ensayo se realizó en presencia de poliaminas. Estos resultados sugieren que las poliaminas están involucradas no sólo en la supervivencia y proliferación del estadío de epimastigote sino también en la metaciclogénesis de los tripomastigotes. Ensayos complementarios preliminares sugirieron que la prototrofía para poliaminas también afectaría la capacidad infectiva de T. cruzi. La cepa y el clon Y-GFP-ODC así como la cepa madre Y-GFP auxótrofa para poliaminas- simples de visualizar por su fluorescencia- resultan una herramienta que permitirá profundizar el estudio del rol de las poliaminas en la Enfermedad de Chagas y en los procesos implicados tales como supervivencia, invasión, proliferación, metaciclogénesis y esparcimiento diferencial en tejidos y órganos.