Expresión de un gen exógeno en epimastigotes de Trypanosoma cruzi

CARRILLO C; CEJAS S; GONZÁLEZ NS; ALGRANATI ID

Mendoza, Argentina

Congreso; XXXV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigaciones Bioquímicas (SAIB); 1999

SAIB

Trypanosoma cruzi , tanto en su forma epimastigote como tripomastigote de cultivo, no es capaz de sintetizar poliaminas por no contener actividad enzimática de ornitina decarboxilasa (ODC). Esta propiedad lo distingue de muchos otros tripanosomátidos. En estudios previos de búsqueda de secuencias homólogas a genes de ODC de otros parásitos, hemos demostrado que la falta de actividad de ODC se debe a la ausencia del gen correspondiente en el genoma de T. cruzi (Carrillo, C. et al. 1999). La transfección de los parásitos con un vector recombinante que contiene la región codificante completa del gen de ODC de Crithidia fasciculata permitieron la obtención de T. cruzi transgénicos con un alto nivel de expresión del gen exógeno tanto en forma transiente como estable. Concomitantemente con esta transformación el parásito se volvió autótrofo para poliaminas y adquirió sensibilidad a DFMO, inhibidor específico de la ODC. La enzima expresada en T. cruzi demostró poseer parámetros cinéticos y peso molecular muy similares a la ODC de C. fasciculata, pero en cambio difirió considerablemente en su estabilidad metabólica: mientras que la enzima expresada en C. fasciculata tiene una alta velocidad de recambio (vida media de 30 min.), cuando se expresa en T. cruzi en considerablemente más estable  (vida media mayor a 4 hs.). Este aumento notable de la estabilidad metabólica sugiere que la maquinaria proteolítica de T. cruzi difiere marcadamente de la de C. fasciculata.