Transformación de Trypanosoma cruzi con el gen de ODC de C. fasciculata. Expresión y caracterización de la actividad foránea

CARRILLO C; CEJAS S; GONZÁLEZ NS; ALGRANATI ID

Huerta Grande, Cordoba, Argentina

Congreso; VI Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias (SAP)-VII Reunión de Redes de Laboratorios (ANLIS–Malbrán); 2000

SAP

Las poliaminas, putrescina, espermidina y espermina, presentes en todos los organismos vivos, cumplen un rol esencial en síntesis de macromoléculas, proliferación y diferenciación celular. Su biosíntesis comienza por la conversión de ornitina en putrescina, por acción de la “ornitina decarboxilasa” (ODC). Trypanosoma cruzi, presenta una marcada dependencia de poliaminas para su proliferación. Sin embargo no sintetiza las poliaminas, sino que las transporta constitutivamente desde el medio externo. Habiendo comprobado que la falta de actividad de ODC se debe a la ausencia del gen correspondiente en el genoma de T. cruzi, epimastigotes de cultivo fueron transfectados con un plásmido recombinante que contiene la región codificante completa del gen de ODC de Crithidia fasciculata. T. cruzi transfectado presentó un alto nivel de expresión del gen exógeno, tanto en forma transiente como estable. Concomitantemente, desarrolló autotrofía para poliaminas y se volvió sensible a DFMO, inhibidor específico e irreversible de la ODC. La actividad específica de la enzima no presentó inhibición por incubación de los cultivos con putrescina o espermidina. La actividad enzimática fluctuó continuamente a lo largo del tiempo del cultivo, sugiriendo la posibilidad de una integración parcial del transgen en el genoma de T. cruzi. La ODC foránea presentó parámetros cinéticos y peso molecular similares a la ODC nativa en C. fasciculata. Sin embargo, la estabilidad metabólica difirió notablemente: mientras que la enzima expresada en C. fasciculata tiene una vida media de 30 minutos, en T. cruzi tiene una vida media mayor a 4 hs. Este notable incremento en la estabilidad sugiere una marcada diferencia entre las maquinarias proteolíticas de T. cruzi y C. fasciculata, y podría estar relacionado con la evolución divergente entre parásitos mono- y digeneicos.