EVALUACIÓN DE LA UTILIDAD DE ESTABILIZANTES PARA EL PROCESO DE LIOFILIZACIÓN DE UN CANDIDATO A VACUNA ANTIRRÁBICA BASADO EN VIRUS CANARYPOX RECOMBINANTE.

MICUCCI, MATÍAS; GARANZINI, DÉBORA; FERNANDEZ, GUILLERMO; RUDAK LILIANA; JURADO ROSANA; DE FILIPPO JAVIER; ZANETTI FLAVIA; PEREZ OSCAR; CALAMANTE GABRIELA

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XII Jornadas de Farmacia y Bioquímica Industrial (JorFyBI), III Congreso Latinoamericano de Farmacia y Bioquímica Industrial.; 2015

Objetivo e Introducción:La rabia es una zoonosis de evolución aguda, que afecta tanto al hombre como a animales domésticos (rabia canina), de interés agropecuario (rabia paresiante)y salvajes (rabia silvestre). La enfermedad es causada por el virus de la rabia (VR) que tiene una distribución mundial, causando aproximadamente 60.000 muertes anuales. En nuestro país la zona de impacto, que estaba restringida a las provincias del norte y noreste del país, se fue ampliando hacia el centro del país por modificaciones en el patrón migratorio de los murciélagos debido al cambio climático. Estos animales son los vectores del ciclo aéreo de la rabia y pueden transmitirla a todo tipo de ganado.La vacunaciónes la principal herramienta de prevención. En la actualidad, toda la demanda es cubierta por vacunas antirrábicas producidas por amplificación viral en sustratos celulares e inactivación química (vacunas de segunda generación). Las innovaciones tecnológicas han permitido desarrollar y producir nuevas vacunas recombinantes utilizando vectores virales modificados comolos provenientes de los poxvirus (vacunas de tercera generación). Estas últimas están ampliamente difundidas en países desarrollados como Estados Unidos, Canadá y países de Europa. En nuestro país se utilizan vacunas antirrábicas de segunda generación importadas o producidas por algunas industrias locales privadas. Es por ello, que el INTA en colaboración con el SVAR han desarrollado un virus canarypox recombinante (denominado CNPV-RG) que porta el gen de la glicoproteína del VR(de la cepa CVS adaptada en el SVAR para su crecimiento en células Vero). Los inmunógenos basados en virus canarypox son capaces de expresar in vivo el antígeno de interés induciendo respuestas inmunes protectoras. Este tipo de vectores son seguros porque no replican en mamíferos por lo cual no se diseminan en el animal vacunado ni hacia el medio ambiente. La eficacia del candidato vacunalCNPV-RG se demostró en el modelo murino de desafío intracerebral, con valores de potencia ≥ 3.0 UI/mLy elevados títulos de anticuerpos neutralizantes de RV durante al menos 1 año.El objetivo de este trabajo fue evaluar la utilidad de estabilizantes (a base de lactosa, gelatina o leche en polvo) durante el proceso de liofilización del candidato vacunal CNPV-RG. Materiales y Métodos:El virus CNPV-RG se amplificó en cultivos primarios de fibroblastos de embrión de pollo (FEP). El título viral se calculó como unidades formadoras de placa (UFP) por mL, luego de la infección de FEP con diluciones seriadas de los stocks virales en medio de cultivo agarizado. Viales conteniendo 1 mL de la suspensión viral de CNPV-RG fueron liofilizados en presencia del estabilizante (gelatina10 mg/mL, leche en polvo 160 mg/mL o lactosa 10 mg/mL) durante 24 h. El stock liofilizado fue reconstituido inmediatamente o luego del almacenamiento a 4ºC, 25ºC o 37ºC por distintos períodos de tiempo (15 días; 2, 3 o 6 meses). Para cada condición (estabilizante/tiempo/temperatura) se determinó el título viral (UFP/mL), y en base a estos resultados se seleccionaron las condiciones para las cuales se evaluó la potencia en el modelo murino de desafío intracerebral según el método del NIH.Resultados:El proceso de liofilización disminuyó el título viral 24;16 o 7,9 veces cuando se utilizó como estabilizante lactosa, leche en polvo o gelatina, respectivamente. Sin embargo, este título disminuyó aún más según la temperatura y tiempo de almacenamiento. Luego de la conservación a 4ºC durante 3 o 6 meses los valores del título viral disminuyeron menos de 10 veces para los tres estabilizantes. En cambio, el almacenamiento a 37ºC durante 15 días causó una disminución del título viral de entre 15 y 26 veces, mientras que la conservación durante 2 meses a 37ºC determinó que los títulos virales disminuyeran a valores