EVALUACIÓN DE LA ESTABILIDAD TÉRMICA DEL CANDIDATO VACUNAL BASADO EN VIRUS CANARYPOX RECOMBINANTE QUE EXPRESA LA GLICOPROTEÍNA DEL VIRUS RÁBICO

MATÍAS MICUCCI; FLAVIA ZANETTI; LILIANA RUDAK; ROSANA JURADO; JAVIER DE FILIPPO; OSCAR PEREZ; GABRIELA CALAMANTE

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología y II Congreso Microbiología Agrícola y Ambiental 2013; 2013

Asociación Argentina de Microbiología

La rabia es una enfermedad zoonótica causada por el virus de la rabia (RV). Las vacunas que se utilizan están basadas en virus inactivado producido en cultivos celulares; son eficaces pero poseen algunas desventajas, por lo que existe un gran interés en el desarrollo de vacunas alternativas que aseguren una adecuada protección de la población susceptible y reduzcan los riesgos y costos que implican la producción y uso de vacunas convencionales. En este sentido, se han obtenido diversas vacunas contra la rabia basadas en poxvirus (expresando la glicoproteína del virus rábico) que resultaron ser buenas inductoras de anticuerpos neutralizantes y protectoras frente al desafío con virus rábico. En nuestro laboratorio se obtuvo un virus canarypox recombinante cuyo genoma codifica para la glicoproteína del virus rábico (CNPV-RG) capaz de inducir una respuesta protectora en ratones, con una potencia relativa de 3,5 Ul/ml respecto de una vacuna antirrábica de referencia (PV-BHK 3). El objetivo de este trabajo fue la evaluación de la estabilidad térmica del candidato vacunal CNPV-RG liofilizado. El virus CNPV-RG se amplificó en cultivos primarios de fibroblastos de embrión de pollo, se fraccionó y liofilizó durante 48 hs en presencia de 10 mg/mL de lactosa. La vacuna recombinante liofilizada se reconstituyó inmediatamente o luego de ser mantenida a 4º, 25º o 37ºC durante un período de 6 meses. Luego, las vacunas reconstituidas se titularon en cultivos celulares y se evaluó su eficacia en el modelo murino. Los animales se vacunaron los días 0 y 7 con las vacunas reconstituidas o de referencia (diluciones 1:5,1:25 y 1:125). En el día 14, los animales se desafiaron por inoculación intracerebral con virus CVS. Durante 14 días se registró el número de animales muertos o con signos clínicos compatibles con rabia respecto del total y se calculó la dilución efectiva 50 (DE50) utilizando el test estadístico de Reed y Muench. La potencia de la vacuna CNPV-RG se calculó como la relación entre los valores de las inversas de las DE50 obtenidas para dicho virus respecto de las obtenidas para la vacuna de referencia. El proceso de liofilización disminuyó entre 5 y 10 veces el título de CNPV-RG presente en la vacuna reconstituida inmediatamente, siendo esta reducción de entre 100 y 10.000 veces para las vacunas almacenadas en cada condición. Los valores de potencia relativa (UI/ml) de CNPV-RG liofilizado fueron de 2.7 UI/mL para la vacuna reconstituida inmediatamente y de 1,7; 1,1 ó 0,3 para las vacunas liofilizadas almacenadas a 4º, 25º o 37ºC, respectivamente. Los resultados obtenidos indican que el proceso de liofilización en presencia de lactosa y el almacenamiento de la vacuna CNPV-RG durante 6 meses disminuye la viabilidad del virus sin embargo, los valores de potencia relativa fueron mayores a 1 para las temperaturas 4º y 25ºC. En base a estos resultados, se propone evaluar la estabilidad térmica de la vacuna liofilizada en presencia de otros estabilizantes.