VECTORES POXVIRALES PARA LA EXPRESIÓN DE ANTÍGENOS DEL VIRUS DE LA BURSITIS INFECCIOSA: SU CARACTERIZACIÓN Y EVALUACIÓN EN POLLOS SPF

FLAVIA ZANETTI; CARLOS FEDERICO; CARDONA ROMINA; OSCAR TABOGA; GABRIELA CALAMANTE

Ciudad Autònoma de Buenos Aires

Encuentro; III Encuentro Latinoamericano de Virólogos. X Congreso Argentino de Virología; 2011

Sociedad Argentina de Virologìa

El virus de la bursitis infecciosa (IBDV) produce destrucción de los linfocitos B que maduran en la bolsa de Fabricio causando una enfermedad aguda y muy contagiosa que provoca inmunosupresión y alta mortalidad en pollos jóvenes. Esta enfermedad produce importantes pérdidas económicas en la industria avícola. El genoma de IBDV está formado por dos segmentos de ARN doble cadena. El segmento B codifica para la polimerasa viral. El segmento A, contiene dos marcos abiertos de lectura (ORF) parcialmente superpuestos. El primer ORF codifica para el polipéptido no estructural VP5 (17 KDa) y el segundo ORF codifica para una poliproteína (pVP2-VP4-VP3) que, a través de la actividad auto-proteolítica de VP4, libera las proteínas VP3 (32 KDa) y VP4 (28 KDa) y el precursor pVP2 (48 KDa), que es luego procesado proteolíticamente para formar la proteína VP2 madura (38 KDa). Los vectores virales no replicativos basados en virus canarypox (CNPV) y vaccinia Ankara modificado (MVA)han sido evaluados exitosamente como candidatos a vacunas para la prevención de enfermedades de interés en salud humana y sanidad animal. Sin embargo, no existen reportes del uso de dichos vectores para el desarrollo de vacunas aviares. El objetivo de este trabajo fue evaluar diversos poxvirus recombinantes que expresan antígenos de IBDV como inmunógenos en pollos certificados como libres de patógenos específicos (SPF). En nuestro laboratorio se obtuvieron 3 virus recombinantes que portan las secuencias codificantes de la proteína VP2 madura (CN-VP2 y MVA-VP2) o de la poliproteína (MVA-poly). En este trabajo, se evaluó la expresión de las proteínas de IBDV mediante Western blot e inmunofluorescencia. En extractos de células infectadas con CN-VP2 o MVA-VP2 se detectó la presencia de la proteína VP2 madura por ambas técnicas. En el caso de MVA-poly, por Western blot se detectó la presencia de la proteína VP3, de pVP2 y muy poca proporción de la proteína VP2 madura, demostrando que el procesamiento de la poliproteína no fue completo. Por inmunofluorescencia se detectaron las 2 proteínas virales (VP2 y VP3). La capacidad inmunogénica de los poxvirus recombinantes se evaluó en pollos White Leghorn SPF por inoculación intramuscular de cultivos de células infectadas. Todos los poxvirus recombinantes indujeron una respuesta inmune humoral con presencia de anticuerpos neutralizantes de IBDV. El mayor título de anticuerpos neutralizantes se obtuvo mediante el esquema (prime-boost) MVA-poly/CN-VP2, siendo de 1024, comparable al obtenido con una vacuna convencional viva de IBDV (cepa intermedia D78). La presencia de anticuerpos neutralizantes en el suero de las aves inmunizadas indicaría el plegamiento correcto de la proteína VP2 debido a que la inducción de dichos anticuerpos es inducida por epitopes conformacionales. Los resultados obtenidos muestran la utilidad de los CNPV y MVA como vectores virales para el desarrollo de vacunas aviares. En el futuro, se propone evaluar el grado de protección conferido por la inoculación de los poxvirus recombinantes frente al desafío con una cepa virulenta de IBDV.