Obtención y caracterización de un virus vaccinia Ankara modificado (MVA) recombinante que expresa un multiantígeno de Babesia bovis

JARAMILLO ORTIZ, JOSÈ; DEL MÈDICO ZAJAC, MARÌA PAULA; ZANETTI, F. A.; WILKOWSKY, SILVINA; CALAMANTE, GABRIELA

Valle Hermoso, Pcia. de Còrdoba

Encuentro; Reuniòn Cientìfica Anual de la Sociedad Argentina de Virologìa; 2012

Asociaciòn Argentina de Microbilogìa

Los vectores virales no replicativos basados en poxvirus fueron evaluados exitosamente como candidatos a vacunas para la prevención de enfermedades de interés en salud humana y sanidad animal. En particular, el virus vaccinia Ankara modificado (MVA), que no replica en la mayoría de las células de mamíferos, constituye uno de los candidatos de elección por su seguridad y versatilidad para la expresión de proteínas heterólogas. La babesiosis bovina es una infección parasitaria transmitida por garrapatas que causa significativa morbilidad y mortalidad en el ganado bovino, especialmente en el norte de nuestro país. Los agentes etiológicos son los protozoarios intraeritrocíticos Babesia bovis y Babesia bigemina. La enfermedad se controla mediante el uso de acaricidas, antiparasitarios y la vacunación con cepas vivas atenuadas. Estas vacunas, efectivas en una única dosis, presentan algunas desventajas en su producción y almacenamiento por lo que existe una demanda tendiente a reemplazar su uso por vacunas de diseño racional que incluyan uno o más antígenos capaces de inducir una respuesta inmune similar a la de la vacuna viva. En este sentido, se han identificado y caracterizado algunas proteínas de Babesia bovis altamente inmunogénicas que podrían ser incluídas en un candidato vacunal multiepitópico. El objetivo de este trabajo fue la construcción de virus MVA recombinante capaz de expresar in vivo el multiantígeno de B. bovis (MAB) que expresa en un único marco de lectura las secuencias codificantes de las proteínas inmunogénicas Msa2-c, Rap-1 y Hsp20. Primero, las regiones codificantes de las proteínas que componen el multiantígeno fueron clonadas por separado en vectores de tipo T y rearmadas por subclonado direccional en un plásmido intermediario. Luego, la secuencia del MAB se clonó en el vector VT-Mtk-GUS río abajo del promotor temprano sintético pE/L de poxvirus. Este VT contiene además un cassette para la expresión de la proteína marcadora beta-glucuronidasa (GUS) y secuencias flanqueantes correspondientes al gen MVA086R, que permiten la recombinación homóloga in vivo con el genoma viral. El VT obtenido se transfectó en cultivos de fibroblastos de embrión de pollo infectados con MVA y los poxvirus recombinantes se aislaron por su capacidad de formar placas de lisis azules en presencia del sustrato de la enzima GUS. La presencia de una banda reactiva del tamaño esperado para el MAB se confirmó por Western blot utilizando antisueros específicos contra las proteínas recombinantes Msa2c, Rap-1 y Hsp20. Para realizar su evaluación como inmunógeno, el virus MVA-MAB se inoculó intraperitonealmente en ratones Balb/C donde se observó la inducción de niveles bajos de anticuerpos de tipo IgG contra las 3 proteínas heterólogas luego de 3 inmunizaciones. En este trabajo se obtuvo y caracterizó por primera vez un vector viral que expresa un multiantígeno de B. bovis capaz de inducir una respuesta inmune humoral específica al ser inoculado en ratones. En el futuro, la respuesta inmune (humoral y celular) inducida por MVA-MAB será evaluada en bovinos.