Actividad bacteriostática del inhibidor de serin proteinasas tipo Kazal de Toxoplasma gondii sobre Pseudomonas syringae y Pseudomonas viridiflava

SANCHEZ LOPEZ, E.; PARIANI, S.; LAGUÍA BECHER, M.; CLEMENTE, M.

CABA

Simposio; VIII Simposio Nacional de Biotecnología REDBIO; 2011

Varios trabajos han demostrado que los inhibidores de serin proteinasas tipo Kazal estarían implicados en la respuesta al ataque de bacterias ya que han mostrado tener acción bacteriostática en ensayos in vitro. Bajo este contexto, nos propusimos evaluar si la proteína recombinante inhibidora de serin proteinasas tipo Kazal de Toxoplasma gondii (TgPI-1) es capaz de interferir con el crecimiento de bacterias que infectan naturalmente plantas. Para ello se evaluó el efecto bacteriostático de este inhibidor sobre el crecimiento de Pseudomonas syringae cepas virulenta y avirulenta, y Pseudomonas viridiflava. Para ello, se cultivaron bacterias en presencia de rTgPI-1 y se monitoreó el creciemiento de las bacterias en cultivo. Se observó que a concentraciones de 7 µM de rTgPI-1 el crecimiento de P. viridiflava se inhibió moderadamente, mientras que la inhibicion del crecimiento fue significativamente más marcado para las dos cepas de P. syringae. Los resultados mostraron que rTgPI-1 tendría actividad bacteriostática a partir de una concentración de 7 µM dado que las células continuaron creciendo más lentamente en el caso de P. viridiflava o detuvieron su crecimiento como en el caso de P. syringae. Además, se evaluó si dicho inhibidor podría unirse a dichos microorganismos. Para ello, se realizó un ensayo de binding para determinar qué tipos de uniones (fuertes o débiles) pueden estar ocurriendo entre la proteína recombinante y los microorganismos aquí analizados. Los resultados mostraron que rTgPI-1 sólo fue capaz de unirse mediante uniones fuertes a P. syringae. El efecto bacteriostático observado para rTgPI-1 sobre bacterias que infectan naturalmente plantas junto con la confirmación de uniones fuertes con P. syringae  apoyan la idea de que la sobreexpresión de esta proteína en plantas podría contribuir a aumentar la resistencia a la infección por estas bacterias.