Expresión de la proteína de choque térmico 83 de Leishmania infantum (LiHsp83) en hojas de tabaco

MELINA LAGUÍA BECHER, MAURICIO KRAEMER Y MARINA CLEMENTE

Chascomús, Provincia de Buenos Aires

Congreso; Sociedad Argentina de Protozoolog¨ªa; 2007

La secuencia correspondiente a LiHsp83 fue amplificada por PCR del pl¨¢smido pQE-Hsp83. El producto obtenido se clon¨® en el vector pBPF¦¸7 entre el promotor 35s del virus del mosaico de coliflor (CaMV 35s) duplicado y el terminador de la transcripci¨®n del gen nopalina sintetasa (T-nos). El cassette de expresi¨®n completo se lig¨® al pl¨¢smido binario de expresi¨®n en plantas pZP200bar. Con la construcci¨®n obtenida se transform¨® la cepa GV3101 de Agrobacterium tumefaciens. Los cultivos de A. tumefaciens recombinante se utilizaron para infiltrar por vac¨ªo hojas de Nicotiana tabacum cv. Xanthi (line X-27-8, que expresa un supresor del silenciamiento g¨¦nico). Se evalu¨® la expresi¨®n de la prote¨ªna LiHsp83 a diferentes d¨ªas pos-infiltraci¨®n (d.p.i). El polvo resultante se resuspendi¨® en dos buffers de extracci¨®n diferentes (buffer Urea 8M, pH:8 [U] o buffer CelLyticP, Sigma [S]). Las prote¨ªnas totales solubles (PTS) extra¨ªdas con ambos buffers se utilizaron para analizar la expresi¨®n de LiHsp83 mediante Western blot. Los mayores niveles de expresi¨®n de la LiHsp83 se detectaron a los 6 d.p.i., obteni¨¦ndose un rendimiento del ~0.3% con respecto a PTS para ambos extractos (S y U). Sin embargo, los niveles de extracci¨®n de las PTS fueron mayores con el buffer S (~13mg/ml) que con el buffer U (~7mg/ml). Adem¨¢s, los productos de degradaci¨®n de LiHsp83 se minimizaron utilizando buffer S.