Interacción de bacteriocinas grupo IIa con antimicrobianos que actúan en la pared celular de bacterias gram positivas.

EMILIANO SALVUCCI[1], LUCILA SAAVEDRA Y FERNANDO SESMA

La Plata

Congreso; Segundo Congreso Argentino de Microbiología General; 2005

Sociedad Argentina de Microbiología General

Las bacteriocinas secretadas por bacterias lácticas tienen un futuro promisorio como biopreservantes en industria alimenticia. Se considera que estos péptidos actúan principalmente disrumpiendo la membrana celular de la célula sensible. Enterocina CRL35 es una bacteriocina perteneciente a la subclase IIa con fuerte actividad antilisteria. Es producida por una cepa de Enterococcus mundtii, aislado de un queso regional de Tucumán. Es un péptido de 43 aa con un peso molecular de 4900 Da, codificado a nivel plasmídico cuyo gen ha sido clonado y secuenciado. Estudios previos demostraron que esta bacteriocina presenta un efecto sinérgico con antibióticos (ATBs) de uso clínico incluso a concentraciones subinhibitorias.>> El objetivo de este trabajo fue evaluar las interacciones existentes entre enterocina CRL35 con mutanolisina y diferentes antimicrobianos (monensina, gramicidina y bacitracina) que actúan a nivel de la pared celular. Los ensayos se realizaron utilizando como cepa sensible Listeria innocua 7. El efecto de las asociaciones entre la bacteriocina y los ATBS se determino calculando la Concentración Inhibitoria Fraccional (CIF). Los índices se calcularon según la siguiente ecuación: CIF = [Conc inhibitoria minima (CIM) de la bacteriocina en combinación] / (CIM de la bacteriocina sola) + (CIM de los ATBs en combinación) / (CIM ATBs solo). Los índices se interpretaron como sigue: sinergia, menores de 0,5; adición, de 0,5 a 1; indiferencia de 1 a 4 y antagonismo a valores mayores de 4. Los valores de FIC obtenidos para gramicidina, monensina y bacitracina fueron de 0.8, 0.75 y 0.8, respectivamente. El efecto fue aditivo para todos ellos.>> Por otro lado, utilizando ensayos de difusión en agar en pocillos próximos se estudió la posible interacción de mutanolisina con sobrenadantes de E. mundtii CRL 35, productor de enterocina CRL35; C. divergens V41, productor de divergicina V41 y de E. faecium CRL 988, productor de enterocina A. El efecto de mutanolisina sobre la actividad de enterocina CRL35 y enterocina A se evidenció como una deformación del halo de inhibición sugiriendo una posible inhibición de la acción de esta bacteriocina. Sin embargo, estas modificaciones no se encontraron cuando se probo el sobrenadante de C. divergens V41.>> Este posible efecto protector de la mutanolisina también fue demostrado en cultivos de la cepa sensible, la cual a concentraciones entre 12,5-100 g/ml permite el crecimiento de la cepa sensible aun en presencia de elevadas concentraciones de bacteriocina (>350 pM).>> Los presentes experimentos constituyen ensayos básicos que permiten aproximarse a un enfoque de estructura/actividad, los cuales serán de suma utilidad para planificar una estrategia de aplicación de las bacteriocinas alimentos modelos