PARTICIPACIÓN DEL PIGMENTO DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS EN LA FOTOINACTIVACIÓN BACTERIANA

DIAZ, ROCIO ESTER ; SULIGOY, CARLOS MAURICIO; SAENZ, DANIEL; CACERES, MARIA EMILIA; CALVO, GUSTAVO; QUIROGA, EZEQUIEL; GIACOMODONATO, MONICA; SORDELLI, DANIEL; CASAS, ADRIANA; BUZZOLA, FERNANDA

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología (CAM) - 2019; 2019

AAM

Introducción y Objetivos: La fotoinactivación bacteriana (FIB) utiliza una molécula fotosensibilizante para generar especies reactivas de oxígeno luego de absorber un fotón de luz. El pigmento estafiloxantina (STX) es un carotenoide presente en las colonias de S. aureus. La estructura molecular de la STX sugiere que podría actuar como una molécula fotosensibilizante endógena para la FIB o podría estar protegiendo a S. aureus de la FIB debido a sus propiedades antioxidantes. En éste trabajo se estudió la respuesta de S. aureus mediada por STX frente a la FIB utilizando azul de toluidina (AT) como fotosensibilizante. Materiales y Métodos: Se utilizaron cinco cepas de S. aureus con diferente grado de pigmentación. Los extractos metanólicos de STX se obtuvieron de suspensiones bacterianas con igual densidad óptica (DO) y se cuantificaron espectrofotométricamente a 450 nm. Para la FIB se iluminaron las suspensiones de S. aureus en presencia de AT (50 μM) con una fuente de luz no coherente en presencia o ausencia de STX agregada exógenamente. Las bacterias viables se cuantificaron por siembra en agar tripteína de soja (TSA) y recuento de las UFC/ml. La respuesta al estrés oxidativo con H2O2 se determinó inmediatamente después del tratamiento de FIB. Resultados: Para las diferentes cepas, se obtuvieron las siguientes DO450 de los extractos de STX: SH1000 (0,47±0,05), Sa14P (0,45±0,12), Sa14 (0,21±0,03), RN6390 (0,16±0,09) y RN6011 (0,09±0,02). El cultivolíquido propició una mayor producción de pigmento respecto del cultivo en medio sólido. Los espectros de absorción de los extractos metanólicos fueron similares entre las cepas con similar pigmentación de sus colonias. Para SH1000, RN6390, Sa14 y Sa14P, la FIB mediada por AT redujo el número de UFC/ml entre 4 y 6 órdenes de magnitud en comparación con los controles. El agregado exógeno de STX previo a la FIB mediada por AT indujo un efecto protector, reduciendo sólo en un orden de magnitud las UFC/ml de las cepas RN6911 (colonia blanca) y SH1000 (colonia naranja). Interesantemente, las células bacterianas incubadas con STX exógena y que sobrevivieron a la FIB mediada por AT resistieron el estrés oxidativo del H2O2, mostrando valores de UFC/ml similares a aquellos de la condición control. En contraste, la exposición al H2O2 destruyó las pocas células bacterianas viables después del tratamiento de FIB en ausencia de STX exógena.Conclusiones: En conjunto, los resultados sugieren que la STX protege a S. aureus de la FIB mediada por AT. La capacidad antioxidante del pigmento podría ser responsable de esta protección.