INVESTIGADORES
GIACOMODONATO Monica Nancy
congresos y reuniones científicas
Título:
Expresión de SopA y SopB en mutantes dam de Salmonella Typhimurium durante la infección de células epiteliales HEp-2
Autor/es:
GIACOMODONATO MN, GARCÍA CATTANEO AS, SARNACKI SH, NOTO LLANA MA, UZZAU S, RUBINO S, CERQUETTI MC.
Lugar:
Córdoba, Argentina
Reunión:
Congreso; XI Congreso Argentino de Microbiología; 2007
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microbiología
Resumen:
La proteína ADN adenina metilasa (Dam) participa en la regulación de genes de virulencia de una gran variedad de patógenos, incluyendo a Salmonella spp. El objetivo de este trabajo es estudiar el efecto de la proteína Dam sobre la expresión y secreción de efectores de la Isla de Patogenicidad 1 de Salmonella (SPI-1), como SopA y SopB. En nuestro laboratorio se obtuvieron mutantes dam de Salmonella Typhimurium con los efectores SopA y SopB marcados con el epitope FLAG, denominadas STD2795 y STD2796, respectivamente. Las cepas fueron cultivadas bajo condiciones inductoras y no inductoras de la SPI-1. La expresión y secreción de SopA y SopB se estudió en los pellets bacterianos y en los sobrenadantes de cultivo, respectivamente. Asimismo, se analizó la expresión de dichos efectores en bacterias intracelulares, luego de la infección de células epiteliales HEp-2. Los resultados del Western blot demuestran que la expresión de ambos efectores es significativamente menor (p<0,05) en las mutantes dam respecto de las cepas salvajes. A su vez, la ausencia de metilación por Dam, permite la expresión de SopA en condiciones bajo las cuales la cepa salvaje no lo expresa (28º C, condiciones no inductoras de la SPI-1), alterando así el patrón de expresión. Con respecto a la secreción de las proteínas al sobrenadante del cultivo bacteriano, las mutantes dam no secretaron SopA bajo ninguna condición de cultivo. En cambio, se evidenció la secreción de SopB bajo condiciones inductoras de la SPI-1 pero a niveles menores (p<0,05) respecto de la cepa salvaje. Por otro lado, el análisis mediante Western blot reveló la presencia de SopA y SopB en bacterias intracelulares a los 20 minutos y a las 24 horas luego de la infección de células Hep-2. Este fenómeno ocurrió aún en ausencia de la proteína Dam.  La expresión de SopA en las mutantes dam resultó ser menor (p<0,05) respecto de la cepa salvaje. Mientras que no se observaron diferencias en cuanto a SopB entre las cepas mutantes y salvajes. En resumen, en este trabajo se demuestra que la proteína Dam participa en la regulación de la síntesis y secreción de SopA en Salmonella Typhimurium.