INVESTIGADORES
GIACOMODONATO Monica Nancy
congresos y reuniones científicas
Título:
Participacion de la metilacion del ADN en la regulacion de la expresion de la Isla de Patogenicidad-5 de Salmonella Typhimurium.
Autor/es:
NOTO LLANA M, SARNACKI SH, BUZZOLA F, CERQUETTI MC, GIACOMODONATO MN.
Lugar:
Ciudad de Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiolog¨ªa (CAM 2013).; 2013
Institución organizadora:
Asociaci¨®n Argentina de Microbiolog¨ªa (AAM)
Resumen:
La metilaci¨®n del ADN por la enzima ADN adenina metilasa (Dam) cumple, entre otros, un papel fundamental en la regulaci¨®n de la expresi¨®n de factores de virulencia de una amplia variedad de pat¨®genos, incluyendo Salmonella spp. SopB es una inositol fosfato fosfatasa que se encuentra codificada en la Isla de Patogenicidad 5 de Salmonella (SPI-5) y participa en eventos tempranos y tard¨ªos de la infecci¨®n. En este trabajo se analiz¨® la participaci¨®n de la metilaci¨®n por la enzima Dam en la regulaci¨®n de la expresi¨®n y translocaci¨®n de SopB in vitro, en cultivo celular e in vivo. Para llevar a cabo tal objetivo, se obtuvo y caracteriz¨® una mutante dam denominada STD2796 (sopB::3xFLAG  ¦¤dam-230 zge-6313::Tn10dCmR) que posee el gen sopB marcado con el epitope FLAG. Dicha cepa se complement¨® con un pl¨¢smido que porta el gen dam salvaje y se denomin¨® STD2796/pIZ833. Posteriormente, se analiz¨® el efecto de la ausencia de metilaci¨®n por Dam sobre la s¨ªntesis y secreci¨®n de SopB, bajo condiciones de cultivo que imitan el ambiente intestinal y bajo condiciones que imitan el ambiente intracelular. La expresi¨®n de SopB se determin¨® in vitro analizando diferentes fracciones del cultivo bacteriano. El sobrenadante del cultivo y el pellet se utilizaron para analizar las prote¨ªnas secretadas y asociadas a la bacteria, respectivamente. El an¨¢lisis mediante Western blot revel¨® una disminuci¨®n en la expresi¨®n y secreci¨®n de SopB en las mutantes dam de Salmonella  Typhimurium respecto de las cepas salvaje y complementada, bajo condiciones que imitan el ambiente intestinal. Mientras que no se logr¨® detectar expresi¨®n y secreci¨®n de SopB en la mutante  dam  bajo condiciones que reproducen el ambiente intracelular. Resultados comparables se obtuvieron cuando se analiz¨® la expresi¨®n del gen sopB en dichas mutantes mediante PCR en tiempo real. Por otro lado, los experimentos en cultivo celular y en el modelo murino demostraron la presencia de SopB en bacterias  dam  intracelulares a las 24 horas luego de la infecci¨®n de c¨¦lulas HEp-2 y en el ganglio linf¨¢tico mesent¨¦rico murino aunque a niveles significativamente menores (p<0,05) respecto de la cepa salvaje. Sin embargo, s¨®lo se logr¨® detectar la translocaci¨®n de SopB al citosol de dichas c¨¦lulas en la cepa salvaje de Salmonella Typhimurium. En resumen, en este trabajo se demuestra que la metilaci¨®n por Dam participa en la regulaci¨®n de la s¨ªntesis y secreci¨®n de efectores que se encuentran en la SPI-5, como ser SopB.