EXPANSIÓN Y CARACTERIZACIÓN EX VIVO DE CÉ- LULAS LIMBARES. EVALUACIÓN DE SU CRECIMIENTO SOBRE DISTINTAS MATRICES BIOCOMPATIBLES PARA SU USO EN LA REGENERACIÓN DE CÓRNEA.

KARIN HAGELIN; MARIA EUGENIA BALAÑA; GUSTAVO JOSÉ LEIRÓS

Congreso; Reunion Anual de la Sociedad Argentina de investigación Clinica; 2014

El epitelio de la córnea se renueva con células troncales ubicadas en el limbo, en la periferia de la córnea. La deficiencia limbar lleva a la conjuntivalización de la córnea, dando una ceguera no tratable por trasplante. La única terapia es la restauración del limbo. Una alternativa es el injerto autólogo. Otra es el transplante de epitelios generados a partir del limbo por ingeniería de tejidos, que requiere de una cantidad suficiente de células para generar construcciones en matrices biocompatibles, y que éstas se mantengan lo más indiferenciadas posible. Fue objetivo de este trabajo la optimización del cultivo de células de limbo humano y la evaluación de diferentes matrices biocompatibles como soportes de crecimiento para ingeniería de tejidos. Se evaluaron cultivos de queratinocitos generados a partir de explantos de limbo humano con y sin ?feeder layer?. Por QRT-PCR se analizó la presencia de transcriptos de isoformas de p63, como marcadoras de ?stemness? y de queratinas asociadas a la diferenciación (CK3 y CK19). Se estableció un Índice de ?stemness?, IS= (p63α/p63ß)/ (CK3/CK19), para evaluar la calidad de los cultivos establecidos. En presencia de ?feeder layer?, el IS mostró reducirse con los sucesivos reexplantos hasta en un orden de magnitud en el tercer re-explanto. En ausencia de ?feeder layer? se observó un patrón errático del IS en los sucesivos re-explantos. Ensayos de expansión celular sobre membrana amniótica, de nanocelulosa y de colágeno generaron epitelios continuos que serán ensayados en un modelo animal de deficiencia limbar que permita evaluar una correlación entre los IS, el tipo de soporte ensayado y el éxito del transplante. Estos resultados permiten especular que la expansión de células limbares de explantos sobre ?feeder layer? mejora las condiciones de ?stemness? y que el uso de un re-explanto temprano sería crucial para fines terapéuticos.