INVESTIGADORES
VOJNOV Adrian Alberto
congresos y reuniones científicas
Título:
Desarrollo de un test molecular de diagnóstico simplificado para Chagas en neonatos.
Autor/es:
LUCIANA LAROCCA; FABIANA G. STOLOWICZ; ADRIÁN A. VOJNOV; CAROLINA CARRILLO
Lugar:
Mar Del Plata
Reunión:
Simposio; SAP 2014 - Simposio Innovación diagnostica en Chagas congénito; 2014
Resumen:
La enfermedad de Chagas, una parasitosis causada por el Trypanosoma cruzi, es endémica en América con más de 10 millones de personas infectadas. Las terapias para tratar el Chagas son relativamente efectivas en la fase aguda de la enfermedad y en los casos infantiles; aumentando la probabilidad de cura cuanto más precoz sea el diagnóstico. En este contexto, en Argentina rige la ?Ley 26.281 - De Control y Prevención del Chagas? que exige que a todo/a recién nacido/a de una mujer portadora debe realizársele un diagnóstico de Chagas. Sin embargo, el algoritmo aplicado para el diagnóstico en neonatos/as puede tomar hasta unos 10 meses pues los métodos disponibles para diagnosticar Chagas en adultos/as e infantes no resultan aplicables en neonatos/as, o su aplicación requiere de tal infraestructura, equipamiento y recursos humanos que se restringe a pocos centros de investigación y/o salud. En el año 2011, el Ministerio de Ciencia, Tecnología e Innovación Productiva a través de la Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica (FONARSEC) convocó a la formación de consorcios público-privados para ?la presentación de proyectos innovadores destinados a solucionar problemas tecnológicos ? (asociados) al diagnóstico de la enfermedad de Chagas?, con especial énfasis en Chagas congénito y neonatos/as. En respuesta a este llamado, conformamos un consorcio entre CONICET y las empresas Unifarma y Cassará, y propusimos diseñar un test de diagnóstico molecular, sensible y específico y a la vez simple e inclusivo (para todo tipo de condición) para neonatos/as. Para ello trabajamos sobre técnicas de amplificación molecular isotérmica, cuya funcionalidad se describe, en bibliografía, para iniciativas de diagnóstico simplificado en distintos patógenos. El desarrollo inicial del test incluyó 3 etapas: ETAPA 1: Selección de secuencias blanco y diseño de primers, mediante adquisición y aplicación un software específico para esta tecnología y análisis bioinformático y depuración de los sets de primers diseñados. ETAPA 2: Puesta a punto de la reacción in vitro. Se efectuaron pruebas para ajustar: i)- condiciones de reacción (tiempo, temperatura, componentes de las mezclas de reacción, etc.); ii)- sensibilidad, según carga de ADN o parasitaria y soportes donde se dispensa la muestra; con muestras artificialmente inoculadas y con dos muestras testigo (positiva y negativa) certificadas por el Instituto Nacional de Parasitología ?Dr. Mario Fatala Chaben? iii)- especificidad, utilizando como controles otros parásitos filogenéticamente emparentados, células humanas y células no relacionadas al parásito ni al hospedador. ETAPA 3: Adecuación de la técnica a condiciones simplificadas o ?POC? (siglas de ?Point of care?), para todo tipo de condición (de equipamiento, infraestructura, de recursos humanos). Para ello, se trabajó en dos puntos clave: la simplificación de la obtención del templado molecular a partir de una muestra de sangre y del método de lectura. La reacción de diagnóstico con el test desarrollado incluye los siguientes pasos: ? Obtención de una muestra de sangre: una gota de sangre del/a neonato/a (no requiere extraccionista). ? Siembra de la muestra en la mezcla de reacción. ? Incubación por 40 minutos a 65°C (en cualquier tipo de dispositivo térmico). ? Revelado del resultado, mediante el sistema de tiras reactivas ?lateral flow lipsticks? (LFD) (del tipo de los tests de embarazo comerciales). El test está aún en etapa de desarrollo y ajuste de parámetros, y seguramente deban ajustarse más detalles tanto al momento de probarlo en muestras a campo como al momento de producirlo a mayor escala. Sin embardo esta experiencia nos anima a seguir adelante y, en un futuro, a proponer desarrollos para otras enfermedades infecciosas.