Marcadores de estrés observados en células CHO expuestas a arsénico.

SORIA, EA; EYNARD, ALDO R; BONGIOVANNI, GUILLERMINA

Mar del Plata, Bs. As

Congreso; 1º Cong. Nacional Conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004

SAIC-SAI-SAFE-SAB-SAN-SAF

Introducción: El arsénico es un cancerígeno altamente concentrado en las capas freáticas del sudeste de la Provincia de Córdoba (hasta 1,2 mg/L). El consumo de este agua produce HACRE (hidroarsenicismo crónico regional endémico) y generalmente deriva en cáncer de piel, vejiga o pulmón. Se ha descripto que el arsénico actúa como un estresor pro-oxidante que induce la expresión de Hsp (heat shock proteins) y activa moléculas transductoras de señales como SAPK2, p38 (stress-activated protein kinases) y MAPK (mitogen-activated protein kinasas) las cuales afectan el crecimiento y la diferenciación celular. Objetivo: encontrar marcadores cuantificables de la respuesta a estrés y de la citotoxicidad inducidos por arsénico en cultivos de células CHO (no tumorales) para posteriormente estudiar meduladores de esas respuestas. Metodología: Cultivo celular: línea celular CHO K1 en medio DMEM con 10% SFB. Se determinará expresión de Hsp70 por Western blot, efectos sobre microfilamentos de actina por inmuno-citoquímica y peroxidación lipídica por medición de dienos conjugados en lípidos de membranas. Resultados: se observó un máximo de expresión de Hsp70 luego de 1 ½ hs de incubación con 200 µM arsenito de sodio, seguido de 3 hs de recuperación sin arsenito. Luego de 2 ½ hs de incubación con 200 µM arsenito de sodio se observó reordenamiento de los filamentos de actina con alteraciones de la forma celular y elevación de la concentración de dienos conjugados (Abs 334 nm/ mg proteína: 173 ± 42 respecto 100 % del control). Además el aumento de dienos conjugados pudo ser prevenido por el agregado de un antioxidante al medio de cultivo. Conclusión: El arasenito de sodio produce estrés en células CHO y la respuesta a estrés puede ser evidenciada por la expresión de Hsp70, cambios morfológicos, alteraciones del citoesqueleto y aumento de la peroxidación lipídica.