BECAS
MENDEZ andrea Analia Elena
congresos y reuniones científicas
Título:
Optimización de la producción de CYCD6;1 recombinante de maíz
Autor/es:
AAE MENDEZ; LB PENA; SM GARZA AGUILAR; JM VAZQUEZ RAMOS; SM GALLEGO
Reunión:
Simposio; XI Simposio Nacional de Biotecnología; 2017
Resumen:
Optimización de la producción de CycD6;1 recombinante de maíz Méndez A.A.E.1, Pena L.B.1, Garza Aguilar S.M.2, Vázquez Ramos J.2, Gallego S.M.11) Universidad de Buenos Aires. CONICET. Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas (IQUIFIB). Facultad de Farmacia y Bioquímica. Dto Química Biológica. Cátedra de Química Biológica Vegetal. 2) Dto Bioquímica, Fac Química, UNAM-CONACYT MéxicoEl crecimiento vegetal depende de la proliferación celular, proceso regulado por el ciclo celular. La progresión del ciclo celular está controlada por quinasas dependientes de ciclinas (CDK) y de sus activadores específicos, las ciclinas. Los complejos formados entre la CDKA y las ciclinas de tipo D (CycD) son responsables de la transición G1-S que pone en marcha la división celular. En plantas existe evidencia de que el equilibrio redox juega un rol esencial en la regulación del ciclo celular. Resultados previos en nuestro laboratorio permitieron asociar alteraciones en el balance redox con la disminución del crecimiento vegetal observado durante el estrés abiótico. Uno de los principales efectos de este desequilibrio es la producción de modificaciones postraduccionales (MPT) de tipo oxidativas en las proteínas, entre ellas las del ciclo celular. Dentro del marco del proyecto donde se busca determinar posibles sitios blanco específicos de oxidación de CycD6;1, se procedió a la clonación de una construcción de CycD6;1 de Zea Mays L. en el plásmido pGEX 4T-2 y posterior transformación de la bacteria de expresión Escherichia coli Rosetta gami? 2 (DE3)pLysS para la producción de la proteína recombinante. Debido a la necesidad de contar con una gran masa de proteína soluble se realizó un ensayo de optimización de la producción de proteína soluble aplicando el método de superficie respuesta utilizando el software DesignExpert®v6. Se diseñó un modelo central compuesto rotable factorial para cuatro variables independientes (DO600nm de inducción, concentración del inductor isopropil-β-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG), tiempo de inducción y temperatura de inducción), cada una con cinco niveles. El modelo ajustado a un polinomio dió como resultado realizar 30 experimentos. El Nivel 0 de las variables fue 0,6 DO del inóculo 600nm, 0,75 mM IPTG, a 22°C durante 5 h de inducción. A partir de los datos obtenidos se optimizó la producción de CycD6;1 soluble bajo las siguientes condiciones: 0,8 de DO del inóculo a 600 nm, 0,8 mM de IPTG, a 26°C durante 5 h de inducción. Los resultados obtenidos aplican sólo a la proteína recombinante estudiada.