INVESTIGADORES
CHECA Susana Karina
congresos y reuniones científicas
Título:
CLONADO, EXPRESIÓN Y PURIFICACIÓN DE LA PROTEÍNA ScsD DE SALMONELLA ENTERICA EN ESCHERICHIA COLI
Autor/es:
SAPER C; MÉNDEZ AAE; SONCINI FC; CHECA SK
Lugar:
Rosario
Reunión:
Jornada; XV Jornadas de Ciencia, Tecnología e Innovación de la UNR; 2021
Institución organizadora:
AREA DE CIENCIA, TECNOLOGIA E INNOVACION PARA EL DESARROLLO DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE ROSARIO
Resumen:
Entre los problemas de salud más prevalentes se encuentran las enfermedades transmitidas por los alimentos (ETA). Dentro de esta clasificación se encuentran las infecciones causadas por Salmonella enterica, uno de los patógenos Gram-negativos más relevantes. S. enterica es el agente causal de gastroenteritis e infecciones sistémicas tanto en el hombre como en animales de importancia comercial. Recientemente se ha reconocido que el cobre (Cu) se distingue entre los elementos manipulados por el sistema inmune innato para el control de la proliferación de patógenos invasores. El Cu, un metal esencial, aunque altamente reactivo y tóxico en grandes cantidades, es acumulado por las células fagocíticas del hospedador con el objetivo de contener la multiplicación intracelular y diseminación de patógenos tales como S. enterica. Por lo tanto, dicho metal se utiliza como aditivo alimenticio en animales de granja para prevenir infecciones. Esto ha incrementado la emergencia de cepas de Salmonella en la que los determinantes de resistencia a antibióticos se asocian en elementos genéticos móviles que incluyen sistemas de resistencia a este metal. Además de causar toxicidad per se, el Cu promueve y exacerba el estrés redox, fundamentalmente en la envoltura celular bacteriana. Se ha reportado que el Cu estimula la expresión del sistema ScsABCD, un grupo de tiorredoxinas putativas de la envoltura de S.enterica que vinculan la resistencia a Cu y al estrés redox. Para iniciar la caracterización del sistema in vitro, se requiere contar con las proteínas completas o sus dominios catalíticos purificados. En este trabajo clonamos, expresamos y purificamos el dominio periplásmico de ScsD (ScsDp), una de estas cuatro proteínas del sistema Scs, asociada a membrana plasmática. Generamos un plásmido que expresa el dominio soluble ScsDp como proteína de fusión procesable a la proteína de unión a maltosa (MBP), y optimizamos la producción de esta proteína recombinante en Escherichia coli BL21. Se purificó MBP-ScsDp a partir de lisados celulares mediante cromatografía de afinidad utilizando una resina a base de amilosa, y se realizó el tratamiento con la proteasa TEV, obteniéndose luego de una nueva cromatografía de afinidad, suficiente ScsDp purificada para realizar distintos ensayos analíticos que permitirán develar el rol de ScsD en la homeostasis en la envoltura de S.enterica.