DESARROLLO DE METODOLOGÍAS DE PRESERVACIÓN DE UN BIOSENSOR BACTERIANO DE METALES TÓXICOS

TRUMPER M; MENDOZA JI; CHECA SK

Rosario

Jornada; XV Jornadas de Ciencia, Tecnología e Innovación de la UNR; 2021

AREA DE CIENCIA, TECNOLOGIA E INNOVACION PARA EL DESARROLLO DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE ROSARIO

Los metales pesados se diseminan en la biósfera debido a procesos geoquímicos y a la actividad antropogénica. Dada su persistencia intrínseca y su alta reactividad química, estas especies contribuyen a la contaminación ambiental perjudicando a la biota y causando patologías crónicas que afectan la salud de poblaciones expuestas. Por lo tanto, resulta esencial disponer de herramientas económicas y simples de utilizar que permitan detectar prematuramente los riesgos de contaminación. En nuestro laboratorio, se han desarrollado biosensores bacterianos fluorescentes para detectar contaminación por metales pesados en agua. Con el propósito de preservar, almacenar y eventualmente transportar estos bio-detectores y posibilitar su implementación en la realización de determinaciones a campo o en laboratorios de baja complejidad, en este estudio se evaluó la liofilización como primer paso para para lograr estos objetivos. Este proceso consiste en la deshidratación de la muestra congelada mediante sublimación en condiciones controladas. Dado que la liofilización es perjudicial para la integridad de las bacterias, evaluamos la eficiencia de distintos agentes crioproctetores (ACP) para preservar la viabilidad celular y la actividad bioreportera de estas herramientas analíticas. Previo al proceso de liofilización, el pellet celular obtenido de un cultivo del biosensor se resuspendió en una solución de sacarosa 10% (p/v), leche descremada 8% (p/v) o glicerol 15% (v/v), ACPs de uso común para preservar E. coli, el chasis bacteriano de nuestros biosensores. Como control se utilizó una solución de PBS 15 mM. Luego de centrifugar nuevamente las muestras, los pellets celulares se congelaron a ?80 ºC durante 24 horas, antes de ser sometidos al proceso de liofilización por 2 horas. Los liófilos se reconstituyeron en una solución de NaCl 15 mM y se evaluó el número unidades formadoras de colonias (UFC) remanentes y la actividad biosensora en paralelo utilizando agua artificialmente aditivada con metales. Se determinó que el mejor agente crioprotector en este proceso es la sacarosa, ya que permitió obtener niveles de supervivencia de los microorganismos 23 veces mayores a los del control y buenos niveles de actividad bioreportera luego de 8 horas de incubación. Estos resultados preliminares sientan las bases para futuros estudios que permitan optimizar los tiempos de respuesta.