Reconocimiento y tolerancia a sales de oro en Salmonella typhimurium

ESPARIZ, M.; PÉREZ AUDERO, M. E.; BOTTA, P.; SPINELLI, S. V.; SUSANA KARINA CHECA; SONCINI, F. C.

Mar del Plata

Congreso; 1º Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Microbiología General (SAMIG); 2004

Sociedad Argentina de Microbiología General (SAMIG)

Reconocimiento y tolerancia a sales de oro en Salmonella typhimurium. Espariz, Martín, Pérez Audero, María E., Botta, Pablo E., Spinelli, Silvana V., Checa, Susana K., y Soncini, Fernando C. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario (IBR-CONICET), Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas, U.N.R., Rosario, Argentina. E-mail: martinespariz@yahoo.com.ar Salmonella es el agente causal de un amplio espectro de enfermedades en animales y en el hombre. La capacidad de Salmonella de persistir y proliferar en los tejidos del hospedador, y en alimentos y aguas contaminadas sugiere que esta bacteria debe contar con un complejo repertorio de genes que le permiten adecuar su metabolismo a las condiciones a las que se enfrenta. Nuestro grupo de trabajo está interesado en ampliar el conocimiento sobre estos procesos de adaptación y en identificar aquellos reguladores transcripcionales que los controlan. Para ello, analizamos la presencia de genes con homología a reguladores de la familia MerR. Estos reguladores han sido implicados en diferentes procesos tales como la resistencia a metales, drogas y estrés oxidativo. Entre los homólogos de MerR detectados, seleccionamos un marco de lectura abierto al que denominamos hmrR, por regulador de respuesta a metales pesados ya que este posee una región con homología a dominios de unión a metales, además del dominio de unión a ADN, conservado en todos los miembros de reguladores del tipo MerR.   Mediante ensayos de actividad de b-galactosidasa y electroforesis/ inmunodetección observamos que HmrR modula la expresión de dos genes hmrT y hmrB, así como su propia síntesis en respuesta a la presencia de sales de oro en el medio de cultivo. Esta regulación es específica, ya que no se observa modulación de la expresión de estos genes en presencia de otros metales. Mediante ensayos de extensión del cebador y de retardo en geles se caracterizaron las regiones promotoras de estos genes y se observó la interacción de HmrR con estas regiones. Mutantes en HmrR mostraron ser más sensibles a oro indicando que este regulador es esencial para la resistencia de Salmonella a sales de dicho metal. Por otro lado, mutantes que carecen de HmrT y/o HmrB, presentaron una tolerancia intermedia, sugiriendo que HmrR regula otros genes implicados en la resistencia a oro. Con la finalidad de identificar nuevos genes involucrados en la tolerancia a oro analizamos la sobrevida en presencia del metal de mutantes en homólogos de distintos sistemas de eflujo de cationes descriptos en Escherichia coli. Los resultados de este análisis revelaron que CusBAC y CopA contribuyen en la detoxificación a Au3+ conjuntamente con hmr. Este último efecto no fue observado en mutantes zntA-.  Sin embargo, la expresión de estos loci no se vió afectada por HmrR o la concentración de oro en el medio de cultivo. En conjunto, estos resultados indican que HmrR está involucrado en la detoxificación de oro en Salmonella, y constituye el primer regulador transcripcional capaz de reconocer específicamente a este catión.