Determinación de actividad alfa-L-ramnosidasa de microorganismos marinos aislados a partir del canal de Beagle a bajas temperaturas

A. E. ALVARENGA; AREVALO M.I.; ABATE C.M

Montevideo

Congreso; XX Congreso Latinoamericano de Microbiología y IX Encuentro Nacional de Microbiólogos; 2010

Alfa-L-ramnosidasa cataliza la hidrólisis de ramnósidos, liberando L-ramnosa de sustratos. Es utilizada industrialmente para disminuir el sabor amargo en jugos cítricos y posee potencial aplicación en mejorar el aroma del vino. El objetivo de este trabajo fue determinar la actividad alfa-L-ramnosidasa de microorganismos marinos aislados del Canal de Beagle que fueron seleccionados a diferentes temperaturas: 8, 20 y 25 ºC y pH 5 y 7. 79 aislamientos fueron desarrollados en Medio Mínimo de Brunner (MMB) agarizado a pH 5 y 7, con ramnosa o naringina como sustrato. 39 microorganismos fueron pre-seleccionados a 8 y 20 ºC por su capacidad de crecimiento en las condiciones mencionadas. Posteriormente fueron inoculados en MMB líquido con ramnosa corroborando así el crecimiento a las temperaturas y valores de pH. Se determinó la actividad en placa utilizando el método de Paoni y col (1984) modificado, a 25 ºC y pH 6 utilizando el sustrato 4-Nitrofenil alfa-Lramnopiranósido (NRP). A partir de la determinación en placa fueron seleccionados seis aislamientos (F6, G3, Ci15, Ci16, Ci19 y Ci20) los cuales fueron caracterizados fisiológica y bioquímicamente a través de la realización de test API 20 NE, test de oxidasa y catalasa, curvas de crecimiento en MMB con ramnosa o glucosa a 25 ºC y pH 7. Se determinó cuantitativamente la actividad enzimática (unidades=U y actividad específica=AE) utilizando NRP a pH 5,6 y 7 a 20 °C a partir del extracto crudo intracelular de los aislamientos seleccionados. Todos los aislamientos seleccionados presentaron actividad a pH 7. Destacandóse el aislamiento Ci20 con la mayor AE (10,41 U/mg). En tres de los aislamientos ensayados se observó actividad a pH 5,6 presentando el mayor valor de AE el aislamiento Ci19 (8 U/mg). El aroma y el sabor del vino están parcialmente influenciados por componentes no volátiles β- glicosilados que pueden ser liberados por la acción de glicosidasas. La actividad alfa-Lramnosidasa a bajas temperaturas de los microorganismos ensayados resulta promisoria en ser aplicada en la Industria Alimentaria.