Expresión de variantes del HBsAg en la levadura Pichia pastoris para mejorar la eficacia de la vacuna anti-hepatitis B actual: implicancias de los genotipos E y F

PRISCILA PERAZZO; NAIR EGUIBAR; NICOLAS RODRIGUEZ; MARÍA JOSE LIMERES; A. D. NUSBLAT; MARIA LUJAN CUESTAS

ROSARIO

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología; 2016

AAM

Introducción: La vacuna anti-hepatitis B actualmente comercializada contiene como inmunógeno al antígeno de superficie del virus hepatitis B  (HBsAg) del genotipo A2 subtipo adw2 salvaje autoensamblado en partículas esféricas que exponen al determinante inmunológico principal a.  Anticuerpos dirigidos contra este epítope conformacional, común a todos los genotipos del HBV, conferirían protección contra la infección (y/o reinfección) con cualquiera de los ocho genotipos del virus.No obstante, se han documentado casos de hepatitis B por virus salvaje de los (sub)genotipos B2, C2, D y F1 en individuos que habían recibido una adecuada inmunización activa  Además, los genotipos E y F son los que presentan la región codificante del determinante antigénico ?a? más divergente de todos.Estas características, junto con la emergencia de las mutantes de escape a la vacuna, han sugerido recientes interrogantes sobre la verdadera eficacia de los planes de inmunización promovidos por la OMS utilizando la actual vacuna contra el HBV y de los inmunoensayos usados para el diagnóstico, particularmente en países como Gambia, donde el genotipo E predomina, como así también en América Central y del Sur donde el genotipo F es el prevalente. Objetivo: Analizar el efecto del HBsAg de los genotipos E, F1b y F4 en relación a la interacción con anticuerpos anti-HBs y compararlo con el de las mutantes de escape C107R, D144A  y G145R.Materiales y Métodos: Se expresó el gen S de los genotipos A2, E, F1b y F4 y de las mutantes de escape C107R, D144A y G145R en la levadura Pichia pastoris. Se determinó la expresión de dichos antígenos HBsAg recombinantes mediante SDS-PAGE y ECLIA. Las partículas obtenidas (VLPs) se caracterizaron mediante TEM y DLS. La reactividad se analizó por ECLIA.Resultados: Se obtuvo una expresión estable de todos los genotipos y mutantes en la levadura P. pastoris. Los niveles de expresión y reactividad obtenidos para los genotipos divergentes E y F fue comparable con aquellos obtenidos para las mutantes de escape mencionadas. Las VLPs obtenidas se ensamblaron adecuadamente y presentaron el tamaño esperado (aproximadamente 20 nm) y una carga neta de superficie negativa, congruente con lo descripto en la bibliografía.Conclusiones: los resultados obtenidos presentan potenciales implicancias para el desarrollo de una nueva formulación vacunal donde se incluyan como inmunógenos los HBsAg de los genotipos E y F en las áreas endémicas  para esos genotipos como así también para mejorar la eficacia de los equipos comerciales empleados en el diagnóstico de la hepatitis B.