INVESTIGADORES
NUSBLAT Alejandro David
congresos y reuniones científicas
Título:
EXPRESIÓN DE VARIANTES DEL ANTÍGENO DE SUPERFICIE DEL VIRUS HEPATITIS B (HBSAG) PARA MEJORAR LA EFICACIA DE LA VACUNA ACTUALMENTE COMERCIALIZADA
Autor/es:
PRISCILA PERAZZO; NAIR EGUIBAR; SORDELLI ANDREA; RODRIGUEZ NICOLAS; RODRIGO GONZALEZ; A. D. NUSBLAT; MARIA LUJAN CUESTAS
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LX Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2015
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
La circulación de mutantes del antígeno de superficie del virus hepatitis B (HBsAg) en presencia de anticuerpos anti-HBs tanto en pacientes que recibieron una adecuada inmunización activa/pasiva, como así también en individuos con hepatitis B crónica durante el curso natural de la infección constituye un importante problema de Salud Pública. D144A y G145R son las mutantes de escape más ampliamente reportadas en el mundo y no están incluidas en las vacunas anti-HBV actualmente comercializadas.Objetivos: optimizar la expresión en células eucariotas del gen s salvaje y mutado en las posiciones D144A yG145R y caracterizar su interacción con anticuerpos neutralizantes para HBsAg salvaje. Materiales y métodos: los genes correspondientes al HBsAg salvaje y mutado fueron sintetizados y clonados en el vector de expresión pPICZa y pTriEx®-63C/LIC y transformados en la cepa Pichia pastoris X-33 o transfectados en distintas células de mamífero, respectivamente (CHO, HeLa, Huh 7, HEK293). Para la transfección, se ensayaron diferentes condiciones  (distintos agentes de tansfección, medios de cultivos, tiempos de transfección, presencia o no de DMSO 1,25%). Para la detección del HBsAg, se tomaron muestras a distintos tiempos y se realizaron ensayos de ELISA comercial y Western blot. Se caracterizaron las VLPs y se midió la reactividad del HBsAg mutado y salvaje in vitro (TEM y DLS) e in silico. Resultados: se logró una moderada expresión en las células HEK293 transfectadas con L-PEI con una relación N/P = 10, a las 144 h post-transfección. Con P. pastoris, se obtuvieron mayores niveles de expresión, y las VLPs obtenidas presentaron un tamaño aproximado de 20 nm y la reactividad con los anticuerpos anti-HBs fue variada.Conclusiones: la optimización de la expresión del HBsAg salvaje y mutado en células de mamífero y en P. pastoris constituye una primera aproximación para un potencial subsiguiente uso para la obtención de futuras vacunas anti-HBV con superior espectro antigénico.
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