Fraccionamiento bioguiado de Cannabis en búsqueda de metabolitos bioactivos para la enfermedad de Alzheimer

MUSSO, F.A.; SALAS, S.R.; PASCUAL, A.C.; MILANO, P. G.; CAVALLARO, V.; MURRAY, A.P.; PASQUARE, S.J

La Plata

Congreso; 3er Congreso Argentino de Cannabis y Salud; 2024

CIC, CONICET,UNLP, UNR, UNCUYO

La Enfermedad de Alzheimer (EA) es una de las enfermedades neurodegenerativas con mayor prevalencia en personas de edad avanzada, y se caracteriza por la destrucción gradual de la memoria privando al paciente de sus capacidades cognitivas. Si bien la EA es una enfermedad multifactorial, aún no se conoce un tratamiento efectivo que pueda revertirla. Actualmente, existen diversos tratamientos paliativos, entre los que se encuentra el uso de inhibidores de las enzimas acetil- y butirilcolinesterasa (ACE y BuCE, respectivamente), como uno de los más utilizados en pacientes. De esta forma, se logra aumentar los niveles cerebrales del neurotransmisor acetilcolina, mejorando la transmisión nerviosa y disminuyendo los síntomas de la enfermedad.Teniendo en cuenta estos antecedentes, el objetivo de nuestro trabajo se basa en la búsqueda de los metabolitos activos de la especie vegetal Cannabis capaces de inhibir a la ACE. Para ello se llevó a cabo un fraccionamiento bioguiado del extracto etanólico (EE) obtenido a partir de las inflorescencias de la variedad “Skunk”. En primer lugar, se cuantificó el contenido de THCA:CBDA del EE por HPLC dando una relación porcentual de 44:56. Luego, se evaluó in vitro la acción del EE sobre la actividad de ACE, por el método espectrofotométrico de Ellman, observándose una inhibición con un IC50 de 215 μg/mL. El fraccionamiento del EE mediante una cromatografía en columna, dio lugar a 4 fracciones: F1, F2, F3 y F4, de las cuales F3 resultó ser la más activa. La cromatografía en capa fina (TLC) de F3 mostró una mancha mayoritaria, cuyo análisis espectroscópico demostró contener una mezcla de THCA y CBDA. La cromatografía de F3 dio lugar a tres subfracciones: SF1, SF2 y SF3, siendo SF1 la de mayor capacidad inhibitoria sobre ACE (72.9% a 70 μg/mL), seguida por SF2 y SF3. A partir de la cuantificación de cada subfracción por HPLC se observó que SF1 es la que presenta mayor porcentaje de THCA (84.7%), seguida por SF2 (48%) y por SF3 (17%), mientras que el porcentaje restante de cada una corresponde a CBDA. Estos resultados indican que en la variedad Skunk de la planta de Cannabis, la principal responsable de la inhibición enzimática de ACE sería la mezcla de THCA y CBDA, y que el primer fitocannabionide sería el compuesto que más contribuye al efecto inhibitorio observado sobre la enzima.Palabras clave: Cannabis, Fraccionamiento bioguiado, acetilcolinesterasa, enfermedad de Alzheimer.