Corazón de ratón perfundido tipo Langendorff: isquemia global simulada versus no simulada

SALAS NEHUEN; GABRIELA MAZZOCCHI; ALICIA MATTIAZZI; CARLOS VALVERDE

Mar del Plata

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS); 2015

SOCIEDAD ARGENTINA DE FISIOLOGÍA

Introducción: El corazón sometido a isquemia sufre una disfunción en el manejo del calcio (Ca2+) intracelular y en la función contráctil, que se recupera parcialmente durante la reperfusión del mismo. La magnitud de estas alteraciones se agrava en función del tiempo de duración de la isquemia. Para el estudio de esta patología se utilizan diferentes preparados, siendo el más común la retroperfusión aórtica (tipo Langendorff) del corazón aislado sometido a isquemia global o regional por cese de flujo. Algunos estudios requieren la utilización de cardiomiocitos aislados, los cuales por sus características son sometidos a isquemia simulada químicamente. Objetivos: Comparar la función mecánica, el Ca2+ citosólico y la fosforilación de proteínas clave en el manejo del Ca2+ citosólico durante la isquemia global no simulada y la simulada químicamente.Materiales y métodos: Para el estudio se utilizaron ratones macho de la cepa Balb/c de 2 meses de edad. Luego de anestesiarlos con ketamina/diazepam (100 y 5 mg/Kg respectivamente) i.p., se practicó una toracotomía para extraer el corazón. El mismo se montó en un equipo de perfusión tipo Langendorff a flujo y temperatura constantes. Para evaluar la actividad mecánica (presión desarrollada por el ventrículo izquierdo, PDVI, y presión de fin de diástole, PFDVI) se colocó un globito de látex en el ventrículo izquierdo, conectado a un transductor de presión con registro por computadora. Para evaluar el Ca2+ citosólico en corazones intactos, los mismos se cargaron con el indicador fluorescente sensible a Ca2+ y se midió la fluorescencia por microscopía de campo local pulsado. Luego de un periodo de estabilización, los corazones se sometieron a dos técnicas de isquemia (15 minutos) y reperfusión (3 minutos) (I/R), una por cese global de flujo (INS), y otra por isquemia simulada (IS) (pH 6,2, ausencia de glucosa, y reemplazo del O2 por N2). Para el estudio de fosforilación de proteínas, se congelaron corazones rápidamente en N2 líquido a diferentes tiempos durante el protocolo de I/R (preisquemia, isquemia, y reperfusión).Resultados: Durante la estabilización (preisquemia, PI) no hubo diferencias significativas en la actividad mecánica de ambos grupos de corazones. En la isquemia se observó una disminución en la PDVI en ambos protocolos (INS e IS), siendo menos pronunciada en la IS. Durante la reperfusión los corazones con IS presentan una mayor recuperación contráctil que los INS (48,5±6,2 vs 11,9±6,6%, respectivamente, P< 0,05). La contractura isquémica al final de la isquemia en los corazones IS fue menor que en los INS (29,0±5,5 vs. 56,6±3,1%, respectivamente, P