GENOTIPIFICACIÓN DE LAS GLICOSILTRANSFERASAS DEL ABO EN SEMEN

ALFARO S; BARONE S; CORDISCO GONZALEZ S; TORREZ M; GARCIA ROSASCO M; ORELLANO E; BRUFMAN A

Casilda, Santa Fe

Congreso; XXXII Reunión Anual Sociedad de Biologia de Rosario; 2012

Sociedad de Biologia de Rosario

Las glicosiltranferasas de los grupos sanguíneos A y B son responsables de la conversión del antígeno H en antígeno A y B. La región codificante del gen ABO esta organizada en 7 exones y fue clonada y secuenciada en 1990 por Yamamoto et al. Cuando se compara con la secuencia de nucleótidos el gen A, el gen O tiene una deleción de una base que lleva a un corrimiento del marco de lectura, resultando en una proteína no funcional. El gen B difiere del gen A en 7 nucleótidos. Se han desarrollado varios métodos basados en amplificación de ADN con el uso de enzimas de restricción para detectar las diferencias entre nucleótidos y glicosiltransferasas (Yamamoto I 1990; Lutz P, 1992; Fisher GF,1992; Yamamoto F,1993). Por ello, el objetivo de este trabajo fue desarrollar un método modificado de PCR (Reacción en cadena de polimerasa) que determine el genotipo del sistema ABO en espermatozoides humanos de una manera rápida, simple y eficiente usando el mismo programa de amplificación y sin utilizar enzimas de restricción. El ADN genómico fue obtenido de 26 muestras de semen en el Laboratorio de Reproducción. Como control, se utilizo ADN de leucocitos de sangre periférica de 15 individuos con fenotipos A, B, AB y O, identificados serológicamente. Como estrategia molecular, se diseñaron dos conjuntos de oligonucleótidos para la amplificación de cada muestra. Estos cebadores permitieron amplificar dos regiones diferentes de las transferasas: Set I, amplifica el exón 5 (*) y Set II, amplifica el exón 7. La reacción de PCR se realizo usando 0.5 µg de ADN en un volumen final de 50 µl con un protocolo de amplificación único y sin el uso de enzimas de restricción. (*)Set I fy29 5´CGTTCTGCTAAG fy47: 5´TGCTGGAGGTGCGCGCCTAC Set II fy46: 5´GAATTCACTCGCCACTGCCTGGGTCTC fy57: 5´GAATTCATGTGGGTGGCACCA Para distinguir entre los genes A, B y O, es necesario amplificar y analizar dos porciones separadas del gen de la transferasa. A través de la comparación de las bandas del producto de la PCR, el genotipo individual fue determinado, evitando el uso de enzimas de restricción. Los resultados obtenidos por la PCR se correlacionaron en un 100% con los fenotipos de los individuos analizados. (ver figura 1) Aunque existen varios métodos que usan PCR y enzimas de restricción para la detección de las diferencias entre los nucleótidos de los genes ABO, la estrategia propuesta permite diferenciar entre individuos homocigotas y heterocigotas para el sistema ABO con un método simple y rápido con 100% de efectividad en relación con el fenotipo. Esta técnica puede ser empleada en medicina legal para estudiar manchas de semen. En estas situaciones es vital obtener resultados de una manera rápida y segura