Apoptosis en células de rabdomiosarcoma embrionario humano inducida por extractos lipídicos de Nicotiana glauca

MARÍA BELÉN FARAONI; FLORENCIA MUSSO; PRONSATO, LUCÍA; MILANESI, LORENA; VASCONSUELO, ANDREA

Petrópolis

Congreso; XII Simpósio Brasileiro de Farmacognosia e XVII Simpósio Latinoamericano de Farmacobotânica; 2019

Sociedade Brasileira de Farmacognosia (SBFgnosia)

INTRODUCCIONRabdomiosarcoma (RMS) es un tumor maligno detejidos blandos que se origina en célulasmiogénicas del músculo esquelético normal, por unadisrupción en la regulación del crecimiento ydiferenciación de las mismas1,2. Este tipo de cáncertiene un pronóstico sombrío, enfatizando lanecesidad de nuevos tratamientos3. Actualmentehan ganado relevancia el uso de compuestosnaturales, los cuales son menos agresivos que laterapia clásica.Diversas plantas presentan efectos antitumoralespor su capacidad de inducir apoptosis4,5. Se haevidenciado que extractos de N. glauca, inducenapoptosis en la línea celular de mioblastos murinosC2C126. Dado que se trata de células miogénicas,se hipotetiza que los extractos de N. glauca tendríanun efecto antiproliferativo/apoptótico en RMS. Seevaluarán los efectos de extractos de N. glaucasobre células de RMS embrionario humano enrelación a la apoptosis y se elucidarán losfitoquímicos implicados.METODOLOGIAEl extracto etanólico se obtuvo por maceración dehojas secas de N. glauca en etanol. Éste, separticionó en tres sub-extractos: hexano, cloroformoy acetato de etilo. De los dos primeros se aislaronácido palmítico y escopoletina respectivamente, através de una cromatografía en columna empleandosílica flash (70-230 Mesh), y una mezcla de hexano:AcOEt como fase móvil. Las estructuras fueronconfirmadas por espectroscopía de RMN, CG-MS ypunto de fusión. Se estudió la viabilidad de célulasde RMS embrionario humano, células RD (CCL-136?) American Type Culture Collection (ATCC®),por tinción con Azul de Metileno y microscopia. Seanalizó el estado del núcleo y mitocondriasmediante la tinción con DAPI y Mitotrackerrespectivamente, para evaluar apoptosis(condensación de cromatina, y agrupación en lazona nuclear de mitocondrias).RESULTADOS Y DISCUSIÓNCuando las células tumorales se trataron con elextracto etanólico se observó una clara disminuciónde la viabilidad celular. Se prosiguió a sufraccionamiento en tres sub-extractos: hexánico,clorofórmico y acetoetílico, con los cuales serepitieron los ensayos de viabilidad. En la Fig. 1 semuestra el orden observado.Figura 1. Ensayo biodirigido del extracto etanólico de N.glauca.Los compuestos responsables de la muerte celularobservada en los sub-extractos hexánico yclorofórmico fueron ácido palmítico (A) yescopoletina (B), respectivamente (Fig. 2).Figura 2. Estructuras correspondientes a ácido palmítico(A) y escopoletina (B).Al tratar las células con cada uno de los compuestosaislados, la escopoletina resultó un agenteapoptótico más poderoso que el ácido palmítico(85% vs. 73% de células muertas).CONCLUSIONESEstos estudios aportan conocimiento al desarrollode terapias con productos naturales para eltratamiento de trastornos hiperproliferativos comoRMS.