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El virus herpes simplex (HSV) es considerado una de las enfermedades de transmisión sexual de mayor prevalencia en el mundo debido a que un alto porcentaje de los casos son asintomáticos y se transmite tanto horizontal como verticalmente. Las úlceras genitales provocadas por HSV aumentan el riesgo de contraer HIV, por lo que es considerado también un co-factor de la infección. Sabiendo que los polisacáridos sulfatados con estructura similar al heparán sulfato poseen actividad antiviral y que su uso frecuente genera resistencia, se seleccionaron variantes de HSV-1 in vitro, por pasajes sucesivos del virus en células Vero en presencia de concentraciones crecientes de 1C3. Se definieron las características citopáticas y el rendimiento viral en distintas líneas celulares y cultivos primarios. Previamente se observó en un modelo murino de infección intravaginal que algunas variantes mostraron una atenuada acción patogénica y la respuesta de citoquinas proinflamatorias fue mínima o nula. Por lo tanto estudiamos posibles alteraciones en la timidína quinasa (TQ), gen relacionado con la virulencia, patogenicidad y reactivación de la latencia, por el método de reducción de unidades formadoras de placas e inhibición del rendimiento, utilizando análogos de pirimidina y purina como el Aciclovir (ACV) y Brivudin (BVDU). Asimismo se comparó la infectividad, producción viral y acción citopática de las variantes en macrófagos murinos peritoneales. Además, se estudió la activación de la translocación del factor NF-kB tanto en dichos macrófagos como en una línea celular de macrófagos (J774) por inmunofluorescencia indirecta (IFI) con el fin de definir la vía implicada en la activación de las citoquinas. Para estudiar el grado de virulencia de nuestras variantes, se utilizó un modelo murino de infección intranasal, para tal fin se realizaron estudios histopatológicos de diferentes órganos y se cuantificó el virus en los mismos por plaqueo directo sobre células vero.El estudio de los clones en distintas líneas celulares y cultivos primarios permitió evidenciar que el fenotipo sincicial depende del tipo celular utilizado mientras que en cultivos primarios murinos de vagina y pulmón, el clon 1C3-syn14-1 mantuvo el fenotipo sincicial en contraste con el efecto típico de redondeamiento celular de la cepa patrón. También se observó que las variantes sinciciales tienden a diseminarse con mayor rapidez respecto de la cepa control en todos los tipos celulares, generando un mayor rendimiento viral a las 24hs p.i. Las variantes clonadas de pasajes superiores al 17, presentaron valores de resistencia entre 8 y 20 veces mayores a la cepa patrón, frente al ACV y el BVDU, poniendo de manifiesto posibles mutaciones en la TQ, mientras que 1C3-syn 14-1 mantuvo su sensibilidad a dichos compuestos. Tanto las variantes como la cepa patrón mostraron capacidad de infectar y tener una moderada replicación en los macrófagos peritoneales murinos, generando acción citopática diferenciada. A su vez, se observaron diferencias en el tiempo de translocación del factor NF-kB, dependiendo de la multiplicidad de infección de las cepas estudiadas. In vivo las variantes virales estudiadas no mostraron diferencias histopatológicas significativas respecto a la cepa patrón. Asimismo, las cepas sinciciales manifestaron un título viral y una velocidad de diseminación multiorgánica mayor en relación al control. Por lo tanto, las variantes virales estudiadas obtenidas por un polisacárido sulfatado mostraron tener atenuada acción patogénica, rápida diseminación, reducida neurovirulencia y escasa activación de citoquinas proinflamatorias, mostrando dichas características dependencia de la vía de inoculación, dosis viral y edad de los animales empleados.

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