Polisacáridos de Nemalion helminthoides

PEREZ RECALDE MERCEDES; CARLUCCI, JOSEFINA; M. C. MATULEWICZ

Mar del Plata

Simposio; XVI SINAQO; 2007

SAIQO (Sociedad Argentina de Investigación en química orgánica)

Estudios previos realizados sobre algas pertenecientes al orden Nemaliales mostraron que éstas biosintetizan un complejo sistema de polisacáridos constituido por xilanos neutros, agaranos y xilomananos sulfatados.1,2 En particular, los xilomananos sulfatados de Nothogenia fastigiata presentaron una elevada actividad antiviral in vitro frente a distintos virus.2 En base a estos resultados se comenzó el estudio de los polisacáridos de Nemalion helminthoides, alga perteneciente al mismo orden y recogida en Cabo Corrientes (Mar del Plata, Argentina). El alga se extrajo con agua a 90°C y el extracto se sometió, a fin de aislar los polisacáridos, a dos procedimientos diferentes: a) diálisis con un corte de peso molecular de 6000-8000 Da, seguida de liofilización (rendimiento 20%) y b) precipitación por volcado del extracto sobre isopropanol (rendimiento 28%). Ambos productos crudos estaban constituidos principalmente por manosa y xilosa en relaciones molares (manosa:xilosa 10:1) semejantes. El producto de diálisis (PD) contenía 22% de sulfato mientras que para el producto de precipitación (PP) el porcentaje fue del 28%. Se determinó también el contenido de proteínas de PD y PP. Cuando se intentó fraccionar PD por cromatografía de intercambio aniónico sobre DEAE Sephadex A-25 (Cl.), eluyendo con agua y soluciones de concentración creciente de cloruro de sodio, sólo se pudo aislar una fracción neutra cuyo análisis y posterior estudio estructural por metilación y RMN de 13C indicó que se trataba de un xilano neutro beta(1->3)-, beta-(1->4)- de bajo peso molecular (5000 Da). Por lo tanto, para fraccionar los polisacáridos sulfatados, se llevó a cabo un método que involucra disolución en agua, precipitación de los polisacáridos sulfatados con cetrimida y redisolución del precipitado con soluciones de concentración creciente de cloruro de sodio (hasta 4 M). Se analizó la composición de las fracciones obtenidas. Se evaluó la actividad de PD y PP y las fracciones principales más sulfatadas frente herpes simplex tipo 1(F) (HSV-1) por ensayo de reducción de placas virales en monocapas de células Vero, y a partir de ello se calculó la CI50. También se evaluó el efecto citotóxico de las fracciones mediante el ensayo de reducción del MTT. Ambos métodos de aislamiento ensayados dieron productos similares. A diferencia de otras algas rojas del mismo orden, en la pared celular de Nemalion helminthoides no se detectó un porcentaje significativo de galactosa. Los resultados obtenidos sugieren, además, un esquema de sulfatación diferente al de los xilomananos de Nothogenia fastigiata. Aún así, las polisacáridos inhibieron in vitro la adsorción de HSV-1 en células Vero.