Detección de Culex Flavivirus (Flaviviridae) en mosquitos Culex bidens y Culex spp., capturados en Pampa del Indio, Chaco.

ORNELA STECHINA; GRISELDA I. ORIA; LUIS A. DÍAZ; MARTA S. CONTIGIANI; MARINA STEIN

Mar del Plata

Jornada; X Jornadas Regional sobre mosquitos; 2016

CONICET. INBIOTEC

Los virus del género Flavivirus (familia Flaviviridae) se clasifican en virus transmitidos pormosquitos (MBV), virus transmitidos por garrapatas (TBV), virus de vector desconocido (NKV) yflavivirus específicos de insectos (FSI). Los FSI se caracterizan por infectar de forma natural a losmosquitos y replicar en células de mosquitos in vitro, pero no parecen replicarse en las células devertebrados o infectar a los seres humanos u otros vertebrados. Sin embargo, debido a que infectanlas mismas especies de mosquitos que actúan como vectores de Dengue, West Nile, Saint LouisEncephalitis, y sumado a la relativa similitud genética, algunos estudios demostraron que mosquitosinfectados con FSI podrían tener un potencial efecto modulatorio, suprimiendo o bloqueando lareplicación de ciertos MBV o por el contrario mejorando la competencia vectorial y por lo tantoaumentando la trasmisión de MBV. Por tal motivo fue de nuestro interés conocer y caracterizar losFSI a partir de la secuenciación de un fragmento del gen NS5 obtenidos de mosquitos colectadosen el Parque Provincial Pampa del Indio, provincia de Chaco. Los mosquitos fueron colectadosdesde diciembre del 2009 al 2011 con trampas tipo CDC y suplementadas con dióxido de carbonoen el Parque Provincial Pampa del Indio, Chaco. Los mosquitos se conservaron a -70°C hasta suprocesamiento. Los pooles se armaron por especie, sexo y fecha de colecta, entre 1 y 50 individuospor pool bajo platina refrigerada. La detección de Flavivirus se realizó utilizando la técnica RT-PCRNested genérica amplificando una región de 143pb correspondiente a un fragmento del gen NS5que codifica para la polimerasa viral. Todas las muestras positivas fueron secuenciadas, pero elanálisis filogenético se realizó con tres de ellas denominadas PI183, PI190 y PI200, las demássecuencias (5) no pudieron ser utilizadas por ser de baja calidad. Las secuencias PI183, PI190 yPI200 fueron comparadas con secuencias de Flavivirus de Insectos citadas para Argentina y otrassecuencias representativas de estos virus obtenidas de la base de datos pública (GenBank). Paramantener el marco de lectura correcto, las secuencias fueron alineadas con ClustalW y se utilizó elmétodo de Neighbour Joining (NJ) basado en matrices de distancia entre taxones (Bootstrap=1000)para obtener un árbol, utilizando el software MEGA versión 4.0.Se procesaron 78 pooles (901 mosquitos) correspondientes a 26 especies. Ocho poolesresultaron positivos para Flavivirus y corresponden a las especies Culex bidens (3 pooles), Culexspp. (4 pooles) y Mansonia spp. (1 pool). El análisis por distancia de las 3 secuencias obtenidas enmosquitos Culex spp. (PI183 y PI200) y Culex bidens (PI190) fueron agrupadas con Flavivirus deInsectos, en particular con Culex Flavivirus (CxFV). Sin embargo no fue posible llevar a cabo unanálisis filogenético más detallado debido a la pequeña longitud del fragmento amplificado ysecuenciado. Se necesitan más estudios que permitan secuenciar regiones mayores del genomadel virus y/o pruebas experimentales con infecciones en mosquitos, y de ésta manera aportar másinformación sobre la relación de estos FSI con los mosquitos y su posible participación en losprocesos de transmisión de otros virus como los MBV.