ANALISIS DE LAS SECUENCIAS DEL GEN DE LA VP1 DE CEPAS LOCALES DE PARVOVIRUS CANINO

GALLO CALDERÓN, MARINA; ROMANUTTI, CARINA; KELLER, LETICIA; GRIPPO, VANINA; LA TORRE, JOSÉ

Rosario, Santa Fé

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología; XIV Congreso Argentino de Microbiología; 2016

Asociación Argentina de Microbiologia

Introducción: El Parvovirus Canino (PVC) es un virus altamente contagioso, que provoca gastroenteritis hemorrágicas severas en cachorros, con altas tasas de morbilidad y mortalidad. Es un virus no envuelto, con estructura icosaédrica, y su genoma a ADN monocatenario, es de aproximadamente 5200 nucleótidos, y de polaridad negativa. El mismo, codifica para 2 proteínas estructurales (VP1 y VP2) y 2 proteínas no estructurales (NS1 y NS2). El 90% de la proteína de la cápside es VP2 y un 10% es VP1, la cual contiene la secuencia completa de VP2 y 143 aminoácidos únicos en el extremo N-terminal. Desde su primer aislamiento en 1978, el PVC ha sufrido cambios antigénicos. Las variantes PVC-2a, PVC-2b, y PVC-2c reemplazaron secuencialmente a la cepa original PVC-2 (presente en la mayoría de las vacunas comerciales). Estas variantes se han descripto en relación a cambios aminoacídicos en la proteína VP2; con respecto a la cepa original PVC-2. En trabajos previos, hemos analizado las secuencias de la VP2 y reportado la presencia de las 3 variantes antigénicas en nuestro país, pero poco se conoce acerca de las secuencias de la proteína VP1 y de hecho, no existen reportes de secuencias de estas proteínas en nuestro país.El objetivo del presente trabajo fue clonar, secuenciar y analizar las secuencias de los genes completos de las proteínas VP1 de cepas Argentinas de PVC.Materiales y Métodos: A partir de hisopados rectales tomados de 2 perros con sintomatología clínica compatible con PVC, se extrajo el ADN. Las muestras fueron acompañadas de un formulario con información referida al animal tal como: sintomatología, historial de vacunaciones, sexo, edad, etc.Para el diagnóstico molecular, se amplificó por PCR, un fragmento de 583 pares de bases (pb) del gen de la VP2, el cual fue secuenciado para determinar la cepa presente en cada muestra clínica. Además, se amplificaron por PCR los genes completos de las proteínas VP1 utilizando DNA Polimerasa (Invitrogen) y primers diseñados para tal fin. Los fragmentos obtenidos, fueron clonados en el vector pGEM-T easy (Promega) y secuenciados por Macrogen Inc (Corea). Finalmente, las secuencias obtenidas, se alinearon y analizaron el programa Clustal W.Resultados: Luego del análisis del fragmento de 583 pb, se determinó que las dos muestras analizadas correspondían a la cepa PVC-2c.El alineamiento a nivel aminoacídico de los 143 aminoácidos exclusivos de la región amino terminal del gen de la VP1, mostró una identidad del 100% entre las dos secuencias correspondientes a las cepas locales de PVC.También, se observó que existe un porcentaje de identidad ≥ 98.9% en el gen completo de la VP1, de las cepas Argentinas (PVC-2c) con respecto a la cepa vacunal (PVC-2).Conclusiones: En este trabajo, se analizaron por primera vez en Argentina, las secuencias de los genes completos de la VP1 de 2 cepas locales de PVC y se demostró que la región exclusiva de VP1 es altamente conservada entre las cepas.