Caracterización molecular de cepas de Parvovirus Canino (PVC) circulantes en la Argentina

GALLO CALDERÓN, MARINA; KELLER L; MARCELA IGLESIAS; MATTION, NORA; LA TORRE, JOSÉ

Córdoba

Congreso; XXIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2009

Sociedad Argentina de Virologia

El Parvovirus Canino (PVC) es un virus altamente contagioso, que provoca miocarditis y gastroenteritis hemorrágicas severas en cachorros. El PVC se libera en grandes cantidades y es sumamente resistente a los cambios bruscos de temperatura y pH, al éter, al cloroformo y a la acción de los desinfectantes comunes, por lo que las infecciones se diseminan con facilidad, persistiendo por tiempo prolongado en áreas contaminadas.Desde su aislamiento en 1978, el PVC ha sufrido cambios antigénicos. Las variantes antigénicas, PVC2a y PVC2b, reemplazaron secuencialmente a la cepa original PVC2.Recientemente, se ha descrito por primera vez en Italia en el año 2000 y luego en Vietnam, España y EEUU la aparición de una nueva cepa denominada PVC2c. Esta variante, tiene una sustitución aminoacídica de un ácido Aspártico (Asp) por un ácido Glutámico (Glu) en la posición 426 (sitio antigénico más importante) de la proteína viral VP2. Si bien la vacunación es la manera más práctica, efectiva y económica de prevenir la enfermedad, se han reportado muchos casos de animales que aun estando vacunados, se enferman. OBJETIVO: el objetivo del presente trabajo consiste en evaluar las diferencias genéticas entre las cepas de PVC circulantes actualmente en Argentina y compararlas con las cepas presentes en el resto del mundo.MATERIALES Y MÉTODOS: se obtuvieron hisopados rectales de animales con sintomatología compatible con PVC. Luego del tratamiento de los mismos con proteinasa K en un buffer de lisis, se extrajo el ADN con (QiaexII, Qiagen®).El fragmento amplificado por PCR para el diagnóstico y caracterización molecular, corresponde a 583 pb del gen de la VP2 que incluyen la posición 426. Este fragmento, permite su secuenciamiento directo a partir del producto de PCR.Además se amplificó por PCR, el gen VP2 de PVC completo, en 4 muestras. Los fragmentos de ADN obtenidos, fueron clonados en PgemT easy vector y secuenciados por Macrogen Inc (Corea). Las secuencias obtenidas, se analizaron y alinearon utilizando el programa Clustal W. RESULTADOS: las 2 cepas Argentinas caracterizadas como PVC2c, mostraron entre si un 99.7% de identidad, lo cual concuerda con la identidad observada en las cepas PVC2c del resto del mundo. En la posición 297, las cepas Argentinas PVC2a y PVC2b, presentan una mutación única (N) no reportada, en lugar de la mutación típica S297A de los aislamientos recientes PVC2a y PVC2b.El análisis de la secuencia VP2, mostró que tanto las cepas PVC2a, PVC2b y PVC2c analizadas en Argentina como en el resto del mundo, presentaron las siguientes mutaciones: M87L, I101T, A300G, D305Y, N375D.En la posición 555, la cepa original PVC2, presenta una (V), la cual fue reemplazada en las cepas PVC2a que aparecieron posteriormente, por una (I). Sin embargo, las cepas PVC2c, PVC2b y PVC2a aisladas recientemente, presentan una reversión al aminoacido original (V).Las variantes PVC2c, PVC2a y PVC2b se encuentran alejadas genéticamente de las cepas PVC2, presentes en las vacunas.CONCLUSIONES: se obtuvieron y analizaron por primera vez en Argentina, secuencias de la VP2 de 4 cepas de PVC Argentinas. Se encontró un alto grado de identidad entre las cepas PVC2c locales y mundiales.