Estudio de isoformas de ADAMTS13 en plaquetas y HUVEC.

CARRIVALE M; ZAPATA VA; KELLER L; SANCHEZ-LUCEROS A; KEMPFER A C; LAZZARI MA

Mar del Plata

Congreso; SAIC; 2008

Se han descrito tres isoformas (ISO) de ADAMTS 13 en biblioteca de cDNA de pulmón ó hígado. La ISO 1 corresponde al gen completo y las ISO 2 y 3 presentan dos deleciones: 1) 3847-4014pb, que corresponde a 55 aa entre el octavo dominio trombospondina-1 y el primer dominio CUB, que comparten la ISO 2 y 3 2) 1272-1365pb que implica 14aa del extremo C-terminal del dominio metaloproteasa y 16aa en el extremo N-terminal del dominio desintegrina en la ISO 3. Se ha descrito que el mRNA de ADAMTS13 se encuentra en plaquetas y HUVEC. Objetivo: Identificar las ISO 2 y 3 de ADAMTS13 y relacionarlas con patologías microangiopáticas. Métodos: Extracción de RNA de plaquetas (1.5x10 9) y HUVEC (6x106) se realizó con Trizol. PCR Real Time utilizando SYBR Green. La caracterización de los productos se realizó por una electroforesis de agarosa 1,5%. Hemos diseñado dos estrategias para la preparación de los primers (P): 1- el P sentido se aparea con secuencias comunes a las tres ISO y el P antisentido en las secuencias originadas por las deleciones. 2- Los P flanquean a las deleciones, con productos de distinta longitud para cada ISO. En ambas se probaron distintas condiciones de reacción, y se utilizó como templado, RNA plaquetario y de HUVEC. Resultados: Se obtuvieron en el orden de 10 µg de RNA total de plaquetas y 80 µg de HUVEC. No se han detectado productos utilizando la estrategia 1. Con la 2, se detectó un patrón de productos para la ISO 1 en HUVEC. Conclusión: La estrategia 1 no dio resultado posiblemente por que las deleciones involucran la región rica en GC. Que la estrategia 2 solo resultara para HUVEC con la ISO 1 indicaría que las ISO 2 y 3 no existen en plaquetas ni HUVEC ó que el límite de detección de los métodos utilizados no sea suficientemente bajo, aunque de los métodos alternativos, electroforesis radiactiva y Real Time con sondas, solo el último sería una opción a tener en cuenta.