VALIDACIÓN DEL CONFORMATION SENSITIVE GEL ELECTROPHORESIS (CSGE) COMO MÉTODO DE SCREENING DEL EXON 22 DEL FACTOR VON WILLEBRAND EN EL DIAGNOSTICO DE LA ENFERMEDAD DE VON WILLEBRAND (VWD) 2N

KELLER L; WOODS AI; KEMPFER A C; FARIAS CE; GROSSO S; LAZZARI MA

Mar del Plata

Congreso; SAIC; 2005

Para el diagnóstico molecular de VWD 2N se usan métodos de screening para evaluar rápida y económicamente gran número de muestras. Se eligió el CSGE por ser el que ofrece menos falsos negativos. En otros trabajos hemos descripto la confiabilidad del mismo en el análisis de los exones 18 al 21 del gen del factor von Willebrand (VWF). En este trabajo comparamos este método con la secuenciación para evaluar su sensibilidad en el screening del exón 22. En 30 pacientes (P) con FVIII y enlace (FVW:VIIIB) disminuído y 20 normales (N) se amplificó el exón 22 por técnicas habituales de PCR y se estudió por secuenciación y CSGE. Por secuenciación (ABI PRISM 310) no encontramos mutaciones, pero se detectaron 6 homocigotas A, 14 heterocigotas y 30 homocigotas G para el polimorfismo normal en la posición G2880A (frecuencia alélica: 0,74/0,26) en P y N. Por CSGE, se hicieron heterodúplex de P+N homocigota G. En el gel se sembraron los productos de PCR del P y del P+N. En todos los casos se observó una sola banda. La presencia de dos bandas sugiere polimorfismo normal o mutación. Deberían existir dobles bandas en las mezclas P+N de los P homocigota A y en las muestras P y P+N de los heterocigotas, dando un 40% de falsos negativos. Como en los exones 20 y 21 los resultados no generan falsos negativos, comparamos las características de los 3 exones. Exón 22: ubicación de la sustitución G2880A dentro del producto de PCR: 125 pb (total: 254 pb); contenido GC: 55,5%. Exón 21: ubicación de la sustitución G2771A: 147 pb (total: 268 pb); contenido GC: 54,5%. Exón 20: ubicación de la sustitución G2555A: 66 pb (total: 202 pb); contenido GC: 58,9%. Debido a que el tamaño del producto de PCR, la ubicación de sustituciones y el contenido de GC son similares en los 3 exones, no hallamos justificación para la ausencia de dobles bandas en el exón 22. Por ello no sería aconsejable la técnica de CSGE como screening para el análisis del exón 22.