Validación de genes de referencia para PCR cuantitativa en tiempo real en adenohipófisis e hipocampo de ratas hembras ciclante

GOTTARDO MF; FERRARIS J; ZARATE S; PISERA D; SEILICOVICH A

Mar del plata

Congreso; LIX Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2014

La técnica de PCR en tiempo real (qPCR), una herramientaampliamente utilizada para el estudio de expresión de genes,requiere la utilización de un gen de referencia adecuado paraobtener conclusiones fiables. El ARNm del gen de referencia debepresentar niveles de expresión similares bajo distintas condicionesexperimentales. Nuestro objetivo fue determinar la utilidad de losgenes GAPDH, β-actina, HPRT y ciclofilina como controles internosdurante el ciclo estral de ratas hembras. La expresión relativade cada gen fue determinada por qPCR en ADNc obtenido deadenohipófisis o hipocampo de ratas sacrificadas en proestro (P),estro (E) o diestro (D). La expresión fue evaluada por el métodode 2-Ct. En la adenohipófisis, HPRT se comportó como un gen deexpresión baja y β-actina como un gen de expresión media. Si bienla expresión de estos genes no varió significativamente durante elciclo estral, mostraron gran variabilidad en cada grupo (HPRT P:1,0±0,5; E:1,4 ±0,8; D 0,6±0,6; β-actina P: 1,0±0,5; E: 1,9 ±0,9;D 1,8 ±1,2; ANOVA). La ciclofilina se comportó como un gen deexpresión media en adenohipófisis, no presentó variaciones ensu expresión durante el ciclo estral, y no mostró variabilidad entreindividuos (P: 1,0±0,3; E: 1±0,2; D: 0,9±0,3; ANOVA). En nuestrascondiciones experimentales, la eficacia obtenida para GAPDHen la adenohipófisis no fue óptima. Sin embargo, se comportócomo un gen de expresión media y no mostró variaciones en elciclo estral en el hipocampo (P: 1,0±0,1; E: 1,2±0,1; D: 1,1±0,1;ANOVA). En conclusión, hemos validado genes de control internopara el análisis de la expresión génica utilizando qPCR duranteel ciclo estral, siendo la ciclofilina el gen más adecuado en laadenohipófisis mientras que GAPDH lo es para el hipocampo.Nuestros datos son de utilidad para estudios de expresión génicaen ratas ciclantes e indican la importancia de la validación del gende referencia utilizado en cada modelo y cada tejido.