Identificación molecular de Aspergillus sp. LBM 134, aislado en Misiones, Argentina

CHUNGARA CLARA INÉS; DÍAZ GABRIELA VERÓNICA ; CONIGLIO ROMINA OLGA; ZAPATA PEDRO DARÍO; VILLALBA LAURA LIDIA

Posadas

Jornada; Jornadas Científico Tecnológicas 45° Aniversario de la Universidad Nacional de Misiones; 2018

Las especies del género Aspergillus son hongos cosmopolitas capaces de colonizar una amplia variedad de sustratos. Debido a que son buenos productores de enzimas de interés industrial, los utilizan en diversos procesos lo que hace necesario determinar el organismo con que se trabaja para conocer su potencial biotecnologico. En este sentido, las técnicas moleculares facilitan la identifcación debido a su especifcidad, sensibilidad y rapidez. Por ello, el objetivo del presente estudio fue identifcar molecularmente a nivel de especie la cepa LBM 134 aislada en la provincia de Misiones ya que en estudios previos este ascomicete presentó niveles altos de enzimas hidrolíticas que podrían utilizarse en la hidrolisis de residuos lignocelulósicos en la industria del bioetanol. Para esto se realizó la extracción de DNA genómico a partir de micelio crecido en medio YES incubado a 28°C durante dos días. Se amplifcó por PCR regiones de DNA ribosomal (ITS, D1/D2) y de los genes de β?tubulina, calmodulina y el factor de elongación 1 utilizando cebadores universales. Dichosamplicones se enviaron a secuenciar y las secuencias devueltas se editaron para obtener secuencias consensos mediante los programas Chromas v2.6.5 y BioEdit v7.0.5. Estas se blastearon en la plataforma online Basic Local Alignment Search Tool (BLAST), provista por el National Center for Biotechnology Information (NCBI) para su identifcación específca. El micelio obtenido en medio YESno presentó esporas lo que facilitó obtener ADN de calidad y en cantidad aceptables permitiendo una amplifcación rápida y exitosa de todas las regiones blanco para los cebadores seleccionados. A su vez, los cromatogramas de las secuencias obtenidas fueron legibles y permitió mediante BLAST identifcar al aislamiento LBM 134 como Aspergillus niger con 100% de query cover para la secuencia de calmodulina, 99% para β?tubulina, factor de elongación 1 y D1/D2 y 98% para ITS.