DISEÑO DE CEBADORES DEGENERADOS PARA AMPLIFICAR UN FRAGMENTO DEL GEN ENDO-1,4-β-XILANASA.

GV DÍAZ; EM GIORGIO; MI FONSECA; LL VILLALBA; PD ZAPATA

Salta, Capital

Congreso; XLI Congreso Argentino de Genética. III Reunión Regional SAG-NOA; 2013

Sociedad Argentina de Genética - Universidad Nacional de Salta

La utilización de endo-1,4-β-xilanasas ha surgido como una tecnología alternativa en el blanqueo de pastas lignocelulósicas, reduciendo de esta manera el uso de compuestos clorados en la industria celulósico-papelera. Nuestro grupo está interesado en el estudio molecular de las enzimas xilanolíticas producidas y secretadas por el hongo de pudrición blanca G. applanatum cepa F, nativo de Misiones y el objetivo particular de este trabajo fue amplificar un fragmento génico codificante para la enzima endo-1,4-β-xilanasa de la familia 11. Para ello, se diseñaron cebadores degenerados que permitan la amplificación de dicho fragmento. Primeramente, se realizó un alineamiento múltiple de secuencias aminoacídicas de endoxilanasas pertenecientes a basidiomicetes, disponibles en la base de datos del NCBI con el programa T-Coffee. Se identificaron dos regiones consenso para el diseño de los cebadores sentido y antisentido, la hipótesis de tambaleo fue utilizada para minimizar el índice de degeneración. A su vez, a cada cebador se le adicionó la secuencia de reconocimiento para la enzima de restricción PstI, en caso de que fuera necesario clonar. Los cebadores diseñados fueron testeados in silico con el programa Fast PCR y ensayados en el laboratorio pudiéndose amplificar un fragmento génico putativo de tamaño similar al esperado de 400pb, que deberá ser corroborado y validado mediante clonación y secuenciación.