Comparación de microRNAs en dos estadíos de Echinococcus granulosus mediante clonado y secuenciación

LAURA PRADA; MARCELA CUCHER; NATALIA MACCHIAROLI; MARA ROSENZVIT

Congreso; IX Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2011

Comparación de microRNAs en dos estadíos de Echinococcus granulosus mediante clonado y secuenciación Prada L, Cucher M, Macchiaroli N, Rosenzvit M Departamento de Microbiología, Parasitología e Inmunología, Facultad de Medicina, UBA. Echinococcus granulosus, agente causal de la hidatidosis quística, es un parásito helminto que presenta una variabilidad de estadíos que asombra por su capacidad de adaptarse a los diferentes medios en los que se desarrolla. Esta característica lo convierte en un modelo interesante para estudios de desarrollo. Sin embargo, la falta de modelos adecuados dificulta este tipo de estudios. Por tal motivo hemos desarrollado en nuestro laboratorio sistemas de cultivo que nos permiten obtener in vitro diferentes estadíos del desarrollo del parásito con alta eficiencia. En los últimos años se ha obtenido evidencia sobre el rol fundamental que los microRNAs cumplirían en el control de múltiples procesos biológicos, inlcuidos los vinculados al desarrollo. El estudio de la regulación génica mediante este mecanismo es un enfoque que ha sido abordado por primera vez en Echinococcus en nuestro laboratorio habiéndose identificado microRNAs del estadío protoescólex y analizado su expresión. En el presente estudio, se han construido dos genotecas de cDNAs de RNAs pequeños (19-33 nucleótidos), una a partir de RNA de protoescólices recién extraídos de quistes hidatídicos porcinos y la otra a partir de RNA de microquistes obtenidos en cultivo en nuestro laboratorio a partir de protoescólices del mismo origen. Se han obtenido aproximadamente 2000 clones de cada genoteca. La idea de este trabajo es analizar un alto número de clones de cada genoteca de cDNA a fin de poder identificar los microRNAs presentes en cada estadío y luego analizar las diferencias de expresión entre éstos. Actualmente se está realizando la secuenciación por Sanger y el análisis bioinformático de los clones obtenidos en ambas genotecas. Los resultados obtenidos hasta el momento indican que la estrategia ha sido exitosa dado que se clonaron microRNAs de ambos estadíos. Los resultados obtenidos en el estadío de protoescólex muestran que se han identificado nuevas isoformas de microRNAs conservados correspondientes a algunos de los microRNAs mayoritarios descriptos en un trabajo previo realizado en nuestro laboratorio. Asimismo se ha clonado una isoforma de un potencial microRNA específico de Echinococcus, aportando mayor evidencia a la existencia de este microRNA. Además, se ha identificado un nuevo microRNA candidato que hemos denominado egr-miR-new31. Este estudio podría proveer una valiosa información sobre los mecanismos involucrados en el desarrollo y diferenciación del parásito.