Identificación y caracterización del primer transportador de pantotenato (TcPPT1) en Trypanosoma cruzi

L. FRACCAROLI,; RUIZ, MD; BALCAZAR, D; L. LAROCCA; STOLOWICS FG; TORRES, PS; CARRILLO C

Congreso; XXVIII Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Protozoologia y Enfermedades Parasitarias; 2016

La enfermedad de Chagas es una parasitosis endémica en América Latina causadapor el protozoo Trypanosoma cruzi. Las terapias actuales son altamente tóxicas y delimitada eficacia por lo que existe una necesidad de identificar blancos para eldesarrollo de nuevas terapias tripanocidas.Las vitaminas son micronutrientes esenciales para todas las células vivas; muchosorganismos las sintetizan de novo mientras que otros las obtienen del medio a travésde transportadores específicos. Evidencias del transporte de riboflavina (vitamina B2) ysus efectos en la biología de T. cruzi fueron reportados previamente por nuestro grupode trabajo. El pantotenato (vitamina B5) es precursor de la coenzima A, involucrada ennumerosas reacciones celulares esenciales.Análisis bioinformáticos sugieren que T. cruzi no sintetiza pantotenato de novo. Dadasu relevancia en distintos tipos celulares, el objetivo del trabajo fue determinar el roldel pantotenato en T. cruzi e identificar sus potenciales transportadores.La tasa de proliferación de epimastigotes de T. cruzi de la cepa Y, evaluada por curvasde crecimiento y MTT, fue significativamente disminuida en medios de cultivo enausencia o con baja concentración de pantotenato. Este efecto antiproliferativo fuerevertido con el agregado de pantotenato en forma dependiente de la concentración.En contrapartida, el efecto proliferativo de pantotenato no fue observado en otrostripanosomátidos como T. brucei, L. mexicana y C. fasciculata.A través de análisis in silico, identificamos un potencial transportador de pantotenato(TcPPT1) que presenta características estructurales descriptas para otras permeasasde T. cruzi. A partir de ADN de epimastigotes de la cepa Y, se amplificó el TcPPT1, seclonó en el vector de expresión p-Trex, y se construyó una cepa de T. cruzi quesobreexpresa TcPPT1 fusionado a mCherry (proteína fluorescente roja). La expresiónde TcPPT1 y mCherry fue confirmada por PCR, RT-PCR y microscopía defluorescencia. Resultados preliminares mostraron un ligero aumento en la proliferaciónde epimastigotes transgénicos en medios con bajas concentraciones de pantotenato.Esta cepa sobreexpresante será utilizada para caracterizar, en comparación con lacepa control, el rol de TcPPT1 en la proliferación de los epimastigotes, metaciclizacióny amastigogénesis así como su localización subcelular.Una caracterización más profunda de este transportador permitirá evaluar su condicióncomo potencial blanco terapéutico.