INVESTIGADORES
CARNEVALE MatÍas Emanuel
congresos y reuniones científicas
Título:
Un método simple para monitorear la concentración de dimetilsulfóxido en protocolos de criopreservación. Aplicación en hepatocitos aislados de ratas
Autor/es:
TOMATIS C.; JUAN DE PAZ L.; OSORIO J.S.; CARNEVALE M.E.; ROBERT M.C.; GUIBERT E.E.; RODRIGUEZ J.V.
Lugar:
Rosario
Reunión:
Jornada; XII Jornadas de Ciencia y Tecnología; 2018
Institución organizadora:
Secretaría de Ciencia y Tecnología, Universidad Nacional de Rosario
Resumen:
Durante el proceso de criopreservación de suspensiones celulares resultacrítica la remoción del agente crioprotector (ACP). Hay una velocidad óptima deremoción para evitar el estrés osmótico debido a las diferentes permeabilidadesde la membrana al agua y al ACP a la temperatura de trabajo. Una opción esrealizar el proceso en etapas progresivas para minimizar los cambios de volumencelular y el posible daño asociado. La evolución de la concentración del ACP enel medio de suspensión celular refleja la concentración intracelular del mismo.Los métodos estándar para dicho monitoreo son: estimación de la osmolalidad delmedio (OSM) y de la concentración del ACP por HPLC o espectroscopía de Fourier. En este trabajo proponemosutilizar el índice de refracción (IR) como indicador de la concentración delACP durante el proceso de agregado y remoción del mismo. Para ello hepatocitos derata fueron criopreservados en Bes-Gluconato-Polietilenglicol Cold Storage(BGP-CS) - 10 % DMSO, almacenados a -196 °C y posteriormente descongelados. ElACP se diluyó en 5 etapas sucesivas con BGP-CS y se resuspendieron en BGP-CS a4 °C. En cada una de las etapas se determinó la concentración de DMSO ([DMSO]) por IR (refractómetro ATAGOPAL-RI), HPLC y OSM (descenso crioscópico). Previamente se realizaron lascurvas de calibración para IR, HPLC y OSM con concentraciones crecientes deDMSO en BGP-CS (0 a 40 %). Se pudo determinar por refractometría que la [DMSO] inicial fue de 10.07 ± 1.86 % mientras que en la resuspensión final fue de 0.32 ± 0.27 % (n=3). Los resultadosmostraron una muy buena correlación estadística del IR con las metodologías comúnmente utilizadas. En conclusión el método refractométrico es una alternativarápida, simple y económica para controlar la calidad de las preparaciones delas soluciones y evaluar la [DMSO] duranteprocedimiento de criopreservación de células.
