Desarrollo de una camara de extraccion de compuestos intracelulares de tejidos de origen animal para la determinacion de biomarcadores

SEQUEIRA LUCAS; MOYANO JESSICA SILVINA; MARTINEZ ANA MARIA; PISTONESI MARCELO

Rio Cuarto

Congreso; 9° Congreso Argentino de Quimica Analitica; 2019

ASOCIACIÓN ARGENTINA DE QUÍMICOS ANALÍTICOS y UNIVERSIDAD NACIONAL DE RÍO CUARTO. FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS, FÍSICO-QUÍMICAS Y NATURALES

DESARROLLO DE UNA CAMARA DE EXTRACCIÓN DE COMPUESTOS INTRACELULARESDE TEJIDOS DE ORIGEN ANIMAL PARA LA DETERMINACIÓN DE BIOMARCADORESSiqueira, L. A.2, Cancio, N.1, Eggly, G. M.3, Moyano, J.1, Stupniki, S.1, Martínez, A. M.1, Santos,R.3, Cavalcanti de Lima, R. A.2, Ugulino de Araujo, M. C.2, Pistonesi, M. F.11 INQUISUR, Dpto. de Química, Universidad Nacional del Sur (UNS)-CONICET, Bahía Blanca,Argentina. 2 Dpto. de Química-LAQA, Universidad Federal da Paraíba, João Pessoa-PB, Brasil. 3Dpto. Ing. Eléctrica y Computadoras, Universidad Nacional del Sur, Bahía Blanca, Argentina. Email:lucaserempac@gmail.comIntroducción. El empleo de bioindicadores y biomarcadores ha tomado gran importancia en losúltimos años en programas de biovigilancia, como herramienta para evaluar el estado fisiológico yel estrés de organismos de diferentes niveles tròficos y promover la comprensión de los mecanismospor los cuales responden a los cambios ambientales [1]. En este trabajo se diseña una cámara deextracción (CE) para la obtención de homogenados de tejidos celulares de origen animal. Dicha CEse acoplará a un sistema Flow-Batch que permita la determinación de biomarcadores asociados aestrés por exposición a xenobióticos.Resultados. La cámara de extracción está formada por un cilindro de vidrio (20 mm de diámetrointerno y 40 mm de altura) cuya base es un piezoeléctrico cerámico circular (1,0 MHz), accionadopor un driver (circuito de potencia), el cual es comandado por un sistema embebido (Arduino UNO)para controlar potencia, frecuencia y tiempo de activación. La homogeneización de tejidos y lisiscelular de hígado de pollo, se realiza empleando una solución de buffer fosfato pH 7,00 a 25±02 ºC.Se evalúa la performance de la CE en la obtención de homogenados evitando la inactivación,desnaturalización y degradación enzimática durante la extracción. Para ello, se emplea un diseñode experimento que permita establecer las condiciones óptimas del proceso de lisis. Se utilizó elmétodo de Taguchi con 4 factores y 3 niveles, con un arreglo ortogonal L9. Se estudió laconcentración de Tritón X-100 (0-2 %v/v), potencia (60-100%), frecuencia (20-40 KHz) y tiempo (90-270 s). Los resultados preliminares obtenidos indican que la frecuencia es un factor significativorespecto a la variable respuesta. Las condiciones óptimas seleccionadas son 60 % potencia, 30KHz frecuencia, tiempo 270 s en ausencia de Tritón X-100.Conclusiones. La cámara de extracción desarrollada es económica, portable, fácil de construir ypermitió la obtención de homogenados celulares que facilitaría la determinación de biomarcadores.El empleo del dispositivo ultrasónico en la CE permite que el proceso sea completamentereproducible y linealmente escalable.Referencias1. R. Capela, J. Raimundo, M.M. Santos, M. Caetano, C. Micaelo, C. Vale, L. Guimarães, M.A. Reis-Henriques (2016). Science of the Total Environment 539, 85-96.