Identificação de genes regulados positivamente pela proteína NUC-2 do fungo Neurospora crassa

GRAS DE; SILVEIRA HC; SANCHES PR; CRESCÊNCIO DE SOUZA AN; MARTINEZ-ROSSI NM; ROSSI A

Foz do Iguaçu

Congreso; 52° Congresso Brasileiro de Genética - 12° Congresso da Asociación Lationamericana de Genética; 2006

Os microrganismos apresentam mecanismos complexos para adaptar-se rapidamente as mudancas do meio ambiente. O fosfato inorganico (Pi), um nutriente essencial para todos os organismos, e requerido em importantes processos celulares como na biossintese de acidos nucleicos e sinalizacao metabolica. O sistema de aquisicao do Pi em Neurospora crassa inclui pelo menos quatro genes regulatorios: nuc-2, preg, pgov e nuc-1. Em baixa concentracao de Pi, NUC-2 inibe o funcionamento do complexo PREGPGOV, ativando assim a fator de transcricao NUC-1 e a expressao de fosfatases acidas e alcalinas, fosfato permeases e nucleases. Visando identificar novos genes envolvidos na resposta adaptativa dos fungos aos niveis de Pi, foi construida uma biblioteca subtrativa de cDNA (SSH) entre as linhagens St.L.74A selvagem e nuc-2A de N. crassa, cultivadas em Pi limitante. De um total de 600 clones subtraidos e avaliados por macro-arrays dot-blot, 96 confirmaram sua expressao diferencial na linhagem selvagem. As sequencias destes clones foram processadas pelos programas Phred e cross-match e posteriormente analisadas pelo algoritmo BLASTx contra a base de dados de N. crassa. Obtivemos um total de 47 genes possivelmente regulados pela proteina NUC-2, sendo 78% similares a proteinas hipoteticas e 22% a proteinas putativas envolvidas em diferentes processos celulares. Com o intuito de obter maior informacao destas ESTs foram determinados os grupos funcionais de acordo com as tres ontologias do consorcio Gene Ontology-GO: processo biologico, componente celular e funcao molecular. Das sequencias incluidas na categoria processo biologico, a maior porcentagem (35%) correspondeu a biossintese proteica. Na categoria componente celular os ribossomos apresentaram a maior frequencia (25%). Por ultimo, das sequencias incluidas na categoria funcao molecular a maior porcentagem correspondeu a constituicao estrutural do ribossomo com 25%. Assim, em todas as categorias foi observada uma maior porcentagem de ESTs relacionadas com a biossintesse de proteinas. Nossos resultados revelaram o envolvimento de novos genes na resposta adaptativa aos niveis exogenos de Pi, alem de ressaltar a importancia da sintese proteica na resposta adaptativa dos fungos, permitindo sua sobrevivencia em condicoes adversas