Construção de uma biblioteca de cDNA e análise do transcriptoma do fungo patogênico Trichophyton rubrum

PERES NT; FALCÃO JP; SANCHES PR; GRAS DE; MAZUCATO M; MARTINEZ-ROSSI NM

Foz do Iguaçu

Congreso; 52° Congresso Brasileiro de Genética - 12° Congresso da Asociación Lationamericana de Genética; 2006

Sociedade Brasileira de Genética

A regulacao da expressao genica e vital para que os microrganismos se adaptem rapidamente a diversas condicoes do meio ambiente, como por exemplo, durante um processo infeccioso, exposicao a agentes toxicos e ate mesmo na presenca de diferentes nutrientes. Portanto, a analise das ESTs (Expressed Sequence Tags) de um organismo e uma das estrategias mais utilizadas na descoberta e na compreensao de mecanismos moleculares envolvidos em diversos processos biologicos. O dermatofito Trichophyton rubrum e um fungo patogenico antropofilico e cosmopolita, que acomete tecidos queratinizados como pele e unhas, tanto em individuos saudaveis como em imunocomprometidos, sendo que nestes pacientes ele pode se tornar invasivo, provocando uma infeccao profunda e disseminada. Estima-se que de 30 a 70% dos adultos sejam portadores assintomaticos deste patogeno e que a incidencia da doenca aumente com a idade. Porem, a biologia de T. rubrum e pouco conhecida, os mecanismos envolvidos na sua patogenicidade nao estao elucidados e seu genoma ainda nao foi sequenciado. Portanto, o objetivo deste trabalho foi gerar um transcriptoma deste patogeno para revelar os genes expressos durante seu crescimento visando uma maior compreensao de sua biologia. Para atingir esse proposito, a estrategia utilizada foi a construcao de uma biblioteca de cDNA total de T. rubrum cultivado por diferentes tempos (16, 24, 48 e 72 horas). A anotacao das sequencias obtidas foi realizada utilizando o algoritmo BLASTx e a categorizacao funcional foi realizada pelo Gene Ontology (GO). Um total de 1440 ESTs foram sequenciadas gerando 56 contigs e 415 singlets, formando um total de 471 unigenes. Deste total, 291 sequencias nao apresentaram similaridade com proteinas depositadas no GenBank, podendo representar genes novos e/ou exclusivos de dermatofitos, e 180 sequencias foram anotadas com sucesso, sendo que 83% apresentaram similaridade com proteinas de diferentes fungos e a maioria (51%) corresponde a proteinas hipoteticas conservadas. Para obter uma maior informacao sobre a funcionalidade das proteinas anotadas, foi realizada a categorizacao pelo GO, revelando a presenca de proteinas estruturais, assim como proteinas envolvidas em diversos processos celulares, tais como biossintese proteica, transporte de eletrons e folding proteico. Desta maneira, este trabalho apresenta um perfil transcricional de T. rubrum, o que contribui para uma melhor compreensao da biologia deste patogeno, alem de gerar um importante banco de dados para outros pesquisadores envolvidos na analise de expressao genica de diferentes fungos.