Identificação de genes diferencialmente expressos no mutante palA1 de Aspergillus nidulans através de uma biblioteca de subtração de cDNA

SILVA EM; FREITAS JS; LEAL J; SQUINA FM; GRAS DE; SILVEIRA HC; SANCHES PR; MARTINEZ-ROSSI NM; ROSSI A

Foz do Iguaçu

Congreso; 52° Congresso Brasileiro de Genética - 12° Congresso da Asociación Lationamericana de Genética; 2006

Sociedade Brasileira de Genética

A ativacao de fatores de transcricao por processamento proteolitico em resposta ao pH ambiente e um evento comum em diversos organismos eucarioticos. Em Aspergillus nidulans, a regulacao da expressao genica pelo pH e mediada pelo gene pacC, o qual codifica um fator de transcricao do tipo zinc-finger, um ativador da transcricao de genes alcalinos especificos e repressor da transcricao de genes acidos especificos. O PacC e modulado por um sinal gerado pelos genes pal (A, B, C, F, H e I) em resposta ao pH alcalino extracelular, resultando em uma mudanca conformacional da proteina PacC, o que torna a sua forma integra suscetivel ao processo proteolitico. Assim, mutacao em qualquer dos genes pal mimetiza crescimento do fungo em pH acido. Para que se inicie a proteolise e necessario que a proteina PalA se ligue aos dois motivos YPXL/I localizados um de cada lado da “signaling protease box”, uma regiao conservada presente na forma integra de PacC. Em seguida, a proteolise e catalisada pela proteina PalB, uma protease da familia das calpainas, responsavel pela conversao da forma integra a forma intermediaria (53KDa). Uma segunda proteolise ocorre atraves de um processo pH-independente convertendo esta forma intermediaria a forma funcional (27KDa). Visando um melhor entendimento da funcionalidade do gene palA, como participante da via transdutora do sinal de pH extracelular, foi construida uma biblioteca de subtracao de cDNA. Neste experimento, foi utilizado o cDNA da linhagem mutante palA1 biA1 (“tester”) e selvagem biA1 de A. nidulans (“driver”), ambas cultivadas em condicoes limitantes de Pi e em pH 5,0. Do total de aproximadamente 600 clones obtidos, 108 clones diferencialmente expressos na linhagem mutante foram confirmados por “Differential Screening”. Esses clones foram sequenciados e submetidos ao BLASTx para verificacao de similaridade. Dentre os transcritos diferencialmente expressos foram identificados genes que codificam proteinas hipoteticas e putativas expressas apenas na linhagem mutante palA1, sugerindo que o gene palA e funcional em pH acido.