Expressão diferencial de genes em Aspergillus nidulans em resposta ao pH ambiente

FREITAS JS; SILVA EM; LEAL J; SQUINA FM; GRAS DE; SILVEIRA HC; SANCHES PR; MARTINEZ-ROSSI NM; ROSSI A

Foz do Iguaçu

Congreso; 52° Congresso Brasileiro de Genética - 12° Congresso da Asociación Lationamericana de Genética; 2006

Sociedade Brasileira de Genética

O fungo Aspergillus nidulans e um organismo nutricionalmente versatil e pode crescer em varias condicoes, incluindo variacoes extremas de pH. Essa versatilidade implica na regulacao do pH homeostatico e no monitoramento do pH extracelular, para que sejam sintetizadas enzimas e permeases que funcionem de acordo com o pH ambiental, como por exemplo, a secrecao de fosfatase acida em pH acido e a secrecao de fosfatase alcalina em pH alcalino. Os primeiros genes envolvidos na regulacao da sintese de enzimas extracelulares e permeases pelo pH do meio de cultura foram isolados e caracterizados em A. nidulans. Mutacoes nos genes pal (A, B, C, F, H e I) aumentam os niveis de fosfatase acida e diminuem os niveis de fosfatase alcalina, quando o crescimento do fungo e efetuado em pH neutro sob condicoes limitantes de Pi. Em contraste, mutacoes no gene pacC diminuem os niveis de fosfatase acida e aumentam os niveis de fosfatase alcalina, nestas mesmas condicoes de cultivo. O gene pacC de A. nidulans codifica uma proteina, PacC, que e um ativador da transcricao de genes alcalinos especificos e um repressor de transcricao de genes acidos especificos. O PacC e modulado por um sinal gerado pelos genes pal (A, etc.) em resposta ao pH alcalino extracelular, cuja funcao seria promover a ativacao proteolitica do fator de transcricao PacC. Visando contribuir para o entendimento molecular da resposta adaptativa ao pH ambiente dos fungos e o modo pelo qual a via de transducao constituida pelos genes pal (A, etc.) dispara o processamento da proteina PacC, foi construida uma biblioteca de subtracao de cDNA, utilizando a linhagem selvagem biA1 de A. nidulans como “tester” e a linhagem mutante palA1 biA1 como “driver”, ambas cultivadas em Pi limitante e pH 5,0. Os cDNAs expressos diferencialmente foram amplificados e clonados, o que permitiu o isolamento de aproximadamente 600 clones. Inicialmente, foram analisados 96 clones por “dot-blot macro-arrays”, dos quais 23 foram confirmados como diferencialmente expressos na linhagem selvagem biA1. Esses clones foram sequenciados e analisados utilizando o programa Phred-CAP3 e posteriormente foi realizado o algoritmo BLASTx para verificacao de similaridade contra a base de dados de A. nidulans. Foram identificadas distintas proteinas hipoteticas e proteinas com funcoes preditas envolvidas em varios circuitos metabolicos. Dessa maneira, o presente trabalho contribui para a identificacao de genes que sao regulados positivamente pelo gene palA, ampliando o conhecimento dos mecanismos moleculares que participam na sinalizacao do pH extracelular em fungos filamentosos