Funcionalidade do gene nuc-2, um componente do circuito regulatório envolvido na aquisição de fosfato em Neurospora crassa

GRAS DE; SILVEIRA HC; FERREIRA-NOZAWA MS; LEAL J; MARTINEZ-ROSSI NM; ROSSI A

Águas de Lindóia

Congreso; 51º Congresso Brasileiro de Genética; 2005

Sociedade Brasileira de Genética

A regulação da expressão gênica é requerida pelos fungos para que eles se adaptem rapidamente às condições de estresse celular. Entre os mecanismos genéticos e moleculares que coordenam  síntese das enzimas envolvidas no sistema fosfato repressível em Neurospora crassa há a participação de pelo menos quatro genes: nuc-1, nuc-2, preg e pgov, existindo um circuito hierárquico entre eles. Sendo assim, o gene nuc-2 é o componente que transmite o sinal de ativação desse circuito regulatório e sua ação é inativada pelo fosfato ou um co-repressor derivado do mesmo. A proteína NUC-2 apresenta um domínio do tipo anquirina repetida (APK) e têm uma variedade de funções biológicas importantes, como inibição de quinase dependente de ciclina (CDK), regulação da transcrição, regulação do desenvolvimento e organização do citoesqueleto. Além dos níveis de fosfato, o monitoramento do pH extracelular é um determinante na secreção das fosfatases Pi-repressíveis, o que aumenta consideravelmente a complexidade dessa resposta adaptativa. Visando obter um melhor entendimento dos mecanismos genéticos e moleculares que controlam a resposta adaptativa dos fungos ao Pi e ao pH ambiente, foi construída uma biblioteca de subtração de cDNA, sendo a linhagem St.L.74A de N. crassa o “driver” e a linhagem mutante nuc-2 (FGSC 1996) o “tester”. Do total de 550 clones obtidos, 50 clones diferencialmente expressados na linhagem nuc-2 foram confi rmados por “dot-blot macro-arrays”. Esses clones foram seqüenciados, analisados no programa Phred Phrap, submetidos ao BLASTx para verificação de similaridade, e identificados cerca de 40 distintas ESTs que correspondem a proteínas hipotéticas, e muitas proteínas putativas envolvidas em vários circuitos metabólicos. Dentre elas, uma MAP quinase também foi confi rmada por “Northern virtual”. Assim, o presente trabalho contribui para a defi nição do papel funcional do gene nuc-2, sugerindo a participação deste em outros processos celulares como vias metabólicas e circuitos regulatórios que permitem aos fungos sobreviverem em condições adversas