INVESTIGADORES
GRAS Diana Ester
congresos y reuniones científicas
Título:
Análise do perfil de expressão gênica do dermatófito Trichophyton rubrum em resposta ao pH ambiente durante o processo de degradação de queratina
Autor/es:
SILVEIRA HC; CAZZANIGA RA; SANCHES PR; MAZUCATO M; MARQUES MMC; PASSOS GAS; GRAS DE; ROSSI A; MARTINEZ-ROSSI NM
Lugar:
Salvador - Bahia
Reunión:
Congreso; 54º Congresso Brasileiro de Genética; 2008
Institución organizadora:
Sociedade Brasileira de Genética
Resumen:
Os dermatófitos como o Trichophyton rubrum são fungos filamentosos patogênicos que, uma vez estabelecidos em seu hospedeiro, buscam nutrientes para o seu desenvolvimento. A secreção de enzimas, como queratinases, é um fator determinante na invasão e utilização dos tecidos do hospedeiro como fonte de nutrientes e é freqüentemente regulada pelo pH. Consequentemente, os mecanismos de instalação e manutenção da infecção no hospedeiro são provavelmente dependentes direta ou indiretamente do monitoramento do pH ambiente. Além disto, o crescimento de T. rubrum na presença de queratina como única fonte de nutriente in vitro é dependente do pH ácido inicial da cultura. Em função do tempo de cultivo, o pH é alterado atingindo valores de pH 8,3-8,9, produzindo um ambiente no qual a maioria das queratinases tem atividade ótima. Assim, a utilização da genômica funcional em larga escala no estudo da modulação da expressão gênica durante as mudanças de pH é fundamental para o entendimento molecular das respostas adaptativas de T. rubrum. Para isto, utilizamos a metodologia dos cDNA microarrays incrementada por supression subtractive hybridization (SSH). Foram selecionadas cerca de 1.500 clones de cDNA, utilizando o banco de dados de ESTs de T. rubrum (PipeLine) existente em nosso laboratório, que é enriquecido de clones oriundos de Bibliotecas Subtrativas obtidas após submeter o T. rubrum ao efeito de uma variedade de estímulos. Esse conjunto de clones foi seqüenciado, anotado, e cada um dos clones foi submetido a quatro reações de PCR. Essas reações foram avaliadas em gel, para verificação da integridade dos amplicons e utilizados na construção da plataforma dos microarrays. Os RNAs de T. rubrum utilizados nas hibridações, foram obtidos durante o processo de degradação de queratina, mimetizando as condições de infecção. Além disso, foi utilizada uma linhagem de T. rubrum com o gene pacC rompido. O gene pacC codifica uma proteína homóloga ao regulador transcricional PacC/Rim101 da conservada via de sinalização do pH. Os resultados obtidos possibilitarão o estabelecimento de redes de interações gênicas que podem revelar genes envolvidos nos mecanismos de patogenicidade deste dermatófito, que se constituirão em potenciais alvos para o desenvolvimento de novas drogas antifúngicas.