Un método simple para monitorear la concentración de dimetilsulfóxido en protocolos de criopreservación. Aplicación en hepatocitos aislados de rata

TOMATIS, C; JUAN DE PAZ L.; OSORIO, J; ROBERT, MARIA CELESTE; GUIBERT E.E.; RODRIGUEZ J.V.

Rosario

Jornada; XII Jornada de Ciencia y Tecnología; 2018

Universidad Nacional de Rosario

Durante el proceso de criopreservación de suspensiones celulares resulta crítica la remoción del agente crioprotector (ACP). Hay una velocidad óptima de remoción para evitar el estrés osmótico debido a las diferentes permeabilidades de la membrana al agua y al ACP a la temperatura de trabajo. Una opción es realizar el proceso en etapas progresivas para minimizar los cambios de volumen celular y el posible daño asociado. La evolución de la concentración del ACP en el medio de suspensión celular refleja la concentración intracelular del mismo. Los métodos estándar para dicho monitoreo son: estimación de la osmolalidad del medio (OSM) y de la concentración del ACP por HPLC o espectroscopía de Fourier. En este trabajo proponemos utilizar el índice de refracción (IR) como indicador de la concentración del ACP durante el proceso de agregado y remoción del mismo. Para ello hepatocitos de rata fueron criopreservados en Bes-Gluconato-Polietilenglicol Cold Storage (BGP-CS) - 10 % DMSO, almacenados a -196 °C y posteriormente descongelados. El ACP se diluyó en 5 etapas sucesivas con BGP-CS y se resuspendieron en BGP-CS a 4 °C. En cada una de las etapas se determinó la concentración de DMSO ([DMSO]) por IR (refractómetro ATAGO PAL-RI), HPLC y OSM (descenso crioscópico). Previamente se realizaron las curvas de calibración para IR, HPLC y OSM con concentraciones crecientes de DMSO en BGP-CS (0 a 40 %). Se pudo determinar por refractometría que la [DMSO] inicial fue de 10.07  1.86 % mientras que en la resuspensión final fue de 0.32  0.27 % (n=3). Los resultados mostraron una muy buena correlación estadística del IR con las metodologías comúnmente utilizadas. En conclusión el método refractométrico es una alternativa rápida, simple y económica para controlar la calidad de las preparaciones de las soluciones y evaluar la [DMSO] durante procedimiento de criopreservación de células.