NUEVA APLICACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE PRESERVACIÓN BES GLUCONATO POLIETILEN GLICOL (BGP) EN CÉLULAS AISLADAS PARA DISPOSITIVO BIOARTIFICIAL. ESTUDIOS DE FUNCIONALIDAD Y VIABILIDAD

TOMATIS, C; BERCA, C; RODRIGUEZ J.V.; EDGARDO ELVIO GUIBERT; MARÍA C. ROBERT

Rosario

Jornada; XI Jornada de Ciencia y Tecnolog; 2017

Secretaria de Ciencia y Tecnología-UNR

Un dispositivo bioartificial necesita de células funcionales las cuales usualmente se preservan en frío hasta el momento de uso. A pesar de la necesidad de una caracterización funcional adecuada no hay al momento una técnica universal, lo que lleva a utilizar una combinación de pruebas.El objetivo principal de este trabajo fue evaluar la preservación hipotérmica de células aisladas de hígados de ratas y una línea celular neuronal Neuro-2a (N2a) -útiles para transplante o dispositivo bioartificial- en la solución BGP-cold storage (BGP-CS), desarrollada para la preservación de órganos por nuestro grupo. Las células de hígado se aislaron por perfusión con colagenasa y se resuspendieron en solución Krebs-Heinseleit. Las células N2a fueron sembradas en placas y cultivadas por 48 h en Medio Esencial Mínimo (MEM) suplementado con 10 % de suero fetal bovino (SFB). Como control se usaron células aisladas frescas (CAF) y reperfundidas en normotermia (1 h, 37 °C). Ambos tipos celulares fueron preservados por 24 h a 4 °C en BGP-CS y medio de cultivo y posteriormente reperfundidas en normotermia. Se ensayaron diferentes pruebas de viabilidad y funcionalidad en cada condición y para cada tipo celular a fin de evaluar la preservación hipotérmica. Se evaluó la permeabilidad de la membrana por exclusión de azul de tripán (EAT) y tinción con ioduro de propidio/Hoechst (IP-H). Se estudió el metabolismo por clivaje de fluoresceína diacetato (FDA) -en combinación con tinción de IP- y metabolización de MTT.En el caso de los hepatocitos, los resultados mostraron que la viabilidad/funcionalidad por IP-H y FDA-IP luego de la preservación con medio fue significativamente menor respecto a CAF y a la preservación con BGP-CS (p